家蚕高迁移率蛋白的表达差异和亚细胞定位（英文）

摘要：

高迁移率蛋白 A(high mobility group A,HMGA)与染色质重塑及癌症转移有密切关系.在胚胎期广泛表达,然而在成年期表达量很低,甚至不表达.以本实验室保存的家蚕蛹 cDNA 为模板,克隆家蚕高迁移率蛋白（Bombyx mori high mobility group A,BmHMGA)开放阅读框(345 bp),构建重组质粒 pET-28a(+)-BmHMGA ,并在 BL21Star(DE3)中正确表达融合蛋白 His-BmHMGA.用 Ni-NTA 柱亲和层析纯化融合蛋白,免疫新西兰兔,获得多克隆抗体；抗体效价1∶12800以上,且具有较高特异性.实时荧光定量 PCR 检测结果表明：基因 BmHMGA从卵、5龄幼虫、蛹到蛾,转录水平依次下降；在5龄幼虫期,BmHMGA 基因的转录水平在头、表皮、卵巢、睾丸、脂肪体、气管、马氏管、丝腺和肠中从高到低分布.通过免疫印迹(Western blotting)法和酶联免疫法半定量分析结果显示.BmHMGA 蛋白在家蚕卵中含量最高,蛾中最低；5龄幼虫头部的 BmHMGA 蛋白含量明显高于其他组织,中肠、马氏管中则没有明显的信号,与 RT-PCR 的结果基本一致.家蚕 Bm N 细胞的免疫细胞化学实验结果显示, BmHMGA 蛋白在细胞质中均匀分布.

关键词：家蚕、高迁移率蛋白、表达差异、亚细胞定位、免疫细胞化学

分类号：Q78(基因工程（遗传工程）)

资助基金：Major State Basic Research Development Program of China “973 Program”2005CB121006;the National High Technology Research and Development Program “863 Project”.2007AA021703 and 2007AA120402;National Natural Science Foundation of China31101831;the Education Department of Zhejiang ProvinceY201226220;the Zhejiang Open Foundation of the Most Important Subjects and Natural Scientific Foundation of Zhejiang ProvinceY3110354

在线出版日期：2014-06-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共12页

页码：237-248