羧酸酯酶 BioH 的克隆表达及其水解活性的定向进化

摘要：

通过分子克隆手段获得大肠杆菌来源的羧酸酯酶 BioH，采用定向进化的方法提高该酶的水解活性以提升其应用价值.通过 PCR 扩增，从大肠杆菌 K12菌株中克隆得到羧酸酯酶 BioH 基因，目的基因长度为771 bp，含256个氨基酸；将其连接到 pET30a（+）质粒上并转入 BL21（DE3）宿主细胞中，经诱导表达得到所需的目的蛋白，该蛋白分子质量约为28.2 ku.野生型的 BioH 水解对硝基苯丁酸酯（p-NPB）的活性为18 U/mg，且该酶具有良好的热稳定性.以 p-NPB 为底物进行高通量筛选，其水解底物为对硝基苯酚（p-NP），在405 nm 处有最大吸收峰.挑选出水解活性提高的突变体，并通过2轮定向进化过程，成功筛选到7个水解活性提高的优良突变体，它们的活性分别提高了20%~100%.结构分析表明，突变体的突变位点均分布在远离活性中心的位置.

关键词：羧酸酯酶 BioH、克隆、表达、定向进化、水解活性

分类号：Q819(生物工程学(生物技术))

资助基金：国家自然科学基金资助项目21176215,21176102

在线出版日期：2013-12-04（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：607-612