流式细胞术检测γδΤ细胞内白细胞介素-2的临床应用价值

摘要：

目的：建立一种人外周血γδΤ细胞细胞内白细胞介素?2（ IL?2）的检测方法。方法分离获取健康人外周血单个核细胞（ PBMC），用结核杆菌低分子多肽抗原（ Mtb?Ag）刺激PBMC，获取较高比例的γδΤ细胞。用佛波醇酯＋离子霉素（ PMA＋IM）刺激PBMC和γδΤ细胞，用蛋白转运抑制剂（ Brefeldin A，BFA）阻断细胞内因子的分泌，用皂角素破膜，流式细胞术检测CD3＋T细胞内CD69阳性率，以确定最佳的破膜时间，用流式细胞术检测γδΤ细胞内的IL?2的表达。不同组间CD3＋T细胞内CD69阳性率及细胞内IL?2的阳性率比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用最小显著性（ LSD）法检验．。结果刺激时间不同，CD3＋T细胞胞内CD69的阳性率表达不同，皂角素破膜时间为15 min时，CD3＋T细胞胞内 CD69的阳性率最高，达（87．82±2．28）％，与处理5 min[CD69的阳性率（66．86±1．99）％]和25 min[CD69的阳性率（81．73±2．51）％]比较，差异有统计学意义（ F ＝112．81， P＜0．05）；不同处理组γδΤ细胞内IL?2表达不同，γδΤ细胞受PMA和IM刺激并有BFA存在时表达最高，达（50．65±6．25）％，与γδΤ细胞组（0．55±0．07）％、γδΤ细胞＋PMA＋IM组（0．91±0．12）％和PBMC＋PMA＋IM＋BFA组（0．21±0．03）％比较，差异有统计学意义（ F ＝321．07， P＜0．05）。结论流式细胞术是一种检测γδΤ细胞内IL?2的较好方法，为γδΤ细胞内其他分子的检测分析奠定了方法学基础。

关键词：γδΤ细胞、白细胞介素2、佛波醇酯类、离子霉素、结核杆菌低分子多肽抗原

分类号：R73;R74

资助基金：泰安市科技发展计划20074043，201440774-38B；山东省高等学校科技计划J14LL03

在线出版日期：2015-12-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：292-295