野生型和突变型乳腺癌标志基因C35蛋白的原核表达和纯化

摘要：

目的 构建野生型和C112S突变型乳腺癌标志基因C35的原核表达载体,使其在原核细胞中高效表达、纯化并予以鉴定.方法 聚合酶链反应(PCR)法扩增野生型和突变型C35基因,将其分别插入原核表达载体pGLO1中,构建重组融合蛋白表达载体野生型pGLO1-C35和突变型pGLO 1-C35,转化大肠杆菌E.coli BL21,经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷诱导表达C35融合蛋白,并对诱导条件进行优化,通过镍离子螯合亲和层析柱纯化野生型和突变型C35融合蛋白,经蛋白质印迹法验证纯化的重组蛋白特异性.结果 成功构建了野生型和突变型C35基因的原核表达质粒,并将两种C35融合蛋白成功表达,最佳诱导表达条件为37℃,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导6h,经纯化后获得高纯度的特异性重组蛋白,浓度达约1.5 mg/mL.结论 在原核表达系统中成功表达、纯化了野生型和突变型C35融合蛋白,为进一步制备基于C35抗血清的乳腺癌早期筛查试剂盒奠定了基础.

关键词：C35基因、基因、肿瘤、原核表达纯化、乳腺肿瘤、诊断

所属期刊栏目：3

分类号：R73;R32

资助基金：国家自然科学基金81041075;山东省自然科学基金Q2007D04

在线出版日期：2015-07-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：1-5