溶血素的定点突变及与表面蛋白A的表达

摘要：

目的 利用基因定点突变技术扩增Ply突变基因△Ply,基因重组技术构建△Ply与PspA基因的串联融合表达蛋白PspA-△Ply.方法 根据肺炎链球菌TIGR4型表面蛋白A和溶血素基因序列设计引物,定点突变法扩增Ply突变基因,PCR法扩增PspA基因.运用基因重组技术构建pET32a-PspA-△Ply表达载体,双酶切与测序验证重组质粒;重组质粒转化人大肠埃希菌BL21(DE3),经不同时间、不同温度、不同浓度IPTG诱导表达融合蛋白,Western免疫印迹鉴定表达产物.结果 Ply突变基因测序证实ply基因的△A146R147碱基成功突变,双酶切与测序证实pET32a-PspA-△Ply构建正确,Western免疫印迹见重组质粒转化菌在120×103现特异性条带.结论 成功实现Ply基因的定点突变,构建PspA-△Ply融合蛋白表达载体,为研究新型抗肺炎链球菌蛋白疫苗奠定基础.

关键词：肺炎链球菌表面蛋白A、肺炎链球菌溶血素、融合蛋白

所属期刊栏目：20

分类号：R378(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：广东省医学科学技术研究基金A2007228

在线出版日期：2010-11-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：2755-2758