靶向HER2的CART细胞构建与对膀胱癌细胞杀伤活性的探索研究

摘要：

目的 制备特异性杀伤人类表皮生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor 2,HER2)表达阳性的膀胱癌细胞的嵌合抗原受体T细胞(chimeric antigen receptor T-Cell,CAR T),初步探索HER2-CAR T细胞治疗膀胱癌的可行性.方法 首先免疫组化法检测膀胱癌患者石蜡组织切片中肿瘤细胞HER2表达情况,然后以赫赛汀单克隆抗体的单链抗体(single chain antibody fragment,scFv)序列作为CAR T的识别序列,构建包含铰链,共刺激分子(CD28和4-1BB胞内域)和CD3z的三代CAR T慢病毒质粒.使用293T细胞包装慢病毒,感染人源外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)细胞,制备HER2-CAR T细胞,并采用流式细胞术检测CAR的转导效率.将CAR T细胞分别与HER2表达阳性并且稳转构建表达荧光素酶的SK-BR3阳性对照细胞和MDA-MB-468阴性对照细胞及T24膀胱癌细胞共培养,采用荧光素酶报告基因检测法检测杀伤效果,利用酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)测定CAR T细胞与癌细胞共孵育时干扰素(Interferon gamma,IFN-)的分泌水平.结果 免疫组化法检测显示多数膀胱癌患者的病理组织高表达HER2.免疫荧光和流式细胞荧光分选技术(fluorescence-activated cell sorting,FACS)显示T24膀胱癌细胞高表达HER2.流式细胞术检测显示T细胞的CAR转导效率为69％,体外共培养实验显示CAR T细胞与T24细胞比为5:1时,杀伤效率达到73％.CAR T细胞对SK-BR3细胞和T24细胞具有较强毒性,但是对于MDA-MB-468阴性对照细胞仅在高效靶比时有较弱杀伤,显示了HER2-CAR T细胞杀伤的特异性.共孵育时,SK-BR3组培养基上清中INF-浓度达到319 pg/mL,T24组培养基上清中INF-浓度为275 pg/mL.结论 成功制备靶向杀伤HER2阳性膀胱癌细胞的CAR T细胞,为CAR T细胞治疗膀胱癌提供了初步的研究支持.

关键词：膀胱癌、人类表皮生长因子受体2、嵌合抗原受体T细胞、细胞毒性

所属期刊栏目：12

分类号：R737.14(肿瘤学)

在线出版日期：2023-03-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：1-5