肌细胞增强因子2D通过负向调控有丝分裂诱导基因6的表达促进肝癌细胞PLC/PRF5和SMMC7721的增殖和迁移

摘要：

目的：观察肌细胞增强因子2D( myocyte enhancer factor 2D,MEF2D)对肝癌细胞PLC/PRF5和SMMC7721增殖和迁移的影响,并探究其是否通过负调控有丝分裂诱导基因6( mitogen-induced gene 6,MIG6)的表达发挥作用。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应技术分别检测肝癌细胞中MEF2D和MIG6转录水平的表达,以MEF2D mRNA表达量作为横坐标,以MIG6 mRNA表达量作为纵坐标,制作线性相关图；用小干扰RNA( small interfering RNA,siRNA)在PLC/PRF5细胞中下调MEF2D和MIG6后,通过细胞增殖与毒性测定试剂盒(7Sea-Cell Counting Kit,7Sea-CCK)和细胞划痕法检测肝癌细胞增殖和迁移能力；用siRNA在PCL/PRF5细胞中下调MEF2D、用MEF2D过表达质粒在SMMC7721细胞系中上调MEF2D后,通过蛋白印迹检测法分别检测MEF2D和MIG6的蛋白质表达水平。根据实验,共分为阴性对照( negative control,NC)组、siMIG6组、siMEF2D组、si2M(同时下调MIG6和MEF2D)组、空白对照组、空载对照组、MEF2D组7组。结果肝癌细胞hcclm3、SMMC7721、PLC/PRF5、HepG2、7703、Huh7、Bel-7402中MEF2D mRNA、MIG6 mRNA表达水平呈现负相关关系(r＝－0.78)。细胞增殖实验,24 h和48 h时,下调MIG6或MEF2D后,与NC组比较,siMIG6组或siMEF2D组中PLC/PRF5细胞增殖能力无显著变化；同时下调MIG6和MEF2D后,与siMEF2D组比较,si2M组中PLC/PRF5细胞增殖能力无显著变化。72 h 时,各组间方差分析差异有统计学意义( F＝20.68、P<0.01)；下调MIG6后,与NC组比较,siMIG6组中PLC/PRF5细胞增殖能力显著增强[光密度( optical density, OD)值为3.73±0.18,t＝3.84、P＝0.02]；下调MEF2D后,与NC组比较,siMEF2D组中PLC/PRF5细胞增殖能力显著下降(OD＝1.79±0.22,t＝3.95、P＝0.02)；同时下调MIG6和MEF2D后,与siMEF2D组比较,si2M组中PLC/PRF5细胞增殖能力增强(OD＝2.99±0.03,t＝4.83、P<0.01)。细胞划痕实验,各组间方差分析差异有统计学意义( F＝42.27、P<0.01)；48 h时,下调MIG6后,与NC组比较,siMIG6组中PLC/PRF5细胞迁移能力显著增强[细胞迁移率为(51±4)％,t＝3.22、P<0.05)]；下调 MEF2D 后,与 NC 组比较,siMEF2D 组中 PLC/PRF5细胞迁移能力显著下降[细胞迁移率为(19±3)％,t＝7.70、P<0.01]；同时下调MIG6和MEF2D后,与siMEF2D组比较,si2M组中PLC/PRF5细胞迁移能力增强[细胞迁移率为(46±3)％,t＝6.99、P<0.01]。蛋白质印迹检测,下调MEF2D后,与NC组比较,siMEF2D组中PLC/PRF5细胞MIG6蛋白表达水平显著上升( t＝7.86、P<0.001)；上调MEF2D后,与空载对照组比较,MEF2D组中SMMC7721细胞MIG6蛋白表达水平显著下降( t＝4.61、P＝0.004)。结论肝癌细胞PLC/PRF5和SMMC7721中MEF2D和MIG6表达量呈负相关关系,MEF2D很可能通过负向调控MIG6的表达从而促进肝癌细胞PLC/PRF5和SMMC7721增殖和迁移。

关键词：肌细胞增强因子2D、有丝分裂诱导基因6、肝细胞癌、负向调控、细胞增殖、细胞迁移

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分类号：Q522;R329.2+8;R735.7(核酸)

资助基金：国家自然科学基金青年项目81502065；山东省自然科学基金青年项目ZR2014HQ009；中国博士后科学基金特别资助项目2016T90613；中国博士后科学基金面上项目2015M580574；山东省博士后创新项目201602037；青岛市自主创新计划应用基础研究项目16-5-1-56-JCH；青岛市博士后应用研究项目2015167

在线出版日期：2017-03-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：6-11,15