长链非编码RNA punisher对血管平滑肌细胞增殖和凋亡的影响及机制

摘要：

目的 探究长链非编码RNA(long noncoding RNA,lncRNA)punisher与动脉粥样硬化的关系及其对血管平滑肌细胞增殖和凋亡的影响及机制.方法 12只健康纯种雄性8周龄载脂蛋白E(apolipoprotein E,ApoE)基因敲除小鼠(ApoE-/-小鼠),通过高脂饲喂制作动脉粥样硬化模型小鼠(模型组);12只健康C57BL/6J小鼠饲以基础饲料为对照组;人体血管平滑肌细胞系根据转染情况分为小干扰-punisher组和阴性对照(negative control,NC)组.通过荧光定量聚合酶链反应测定模型组与对照组小鼠主动脉弓的punisher表达.通过合成punisher的小干扰RNA作为反向对照抑制punisher在人血管平滑肌细胞中的表达,应用实时荧光定量聚合酶链反应验证punisher表达情况;分别采用细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)、划痕实验及流式细胞术检测抑制punisher表达对人血管平滑肌细胞增殖、迁移和凋亡的影响;蛋白印迹法检测B淋巴细胞瘤-2(B-cell leukemia-lymphoma-2,Bcl-2)、半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(cysteinyl aspartate specific pro-teinase 3,caspase3)、caspase8、p-p38、p53凋亡相关蛋白的表达.结果 ①血脂4项及血管苏木精-伊红染色证明造模成功.荧光定量聚合酶链反应显示,动脉粥样硬化模型组小鼠血管punisher表达高于对照组(P<0.05);②CCK-8检测显示小干扰-punisher组的光密度值在转染36 h之后低于NC组(t36=2.683、P<0.05,t48=2.554、P<0.05);划痕实验显示小干扰-punisher组细胞迁移低于NC组(t=3.136、P<0.05);③流式细胞术显示,小干扰-punisher组中凋亡细胞数占比多于NC组(22.6%和11.7%,χ2=4.245、P<0.05);④蛋白印迹法显示小干扰-punisher组Bcl-2、caspase3-30×103、p53蛋白表达水平明显低于NC组(t分别为9.546、5.647、5.42,P<0.05),caspase3-17×103蛋白表达水平高于NC组(t=4.892、P<0.05).结论 沉默lncRNA punisher可以促进血管平滑肌细胞的凋亡并抑制其增殖.

关键词：长链非编码RNA、动脉粥样硬化、细胞凋亡、血管平滑肌细胞

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分类号：Q522;R329.2+8;R541.4(核酸)

资助基金：中国博士后科学基金2016M590616;山东省博士后创新项目201601016

在线出版日期：2016-12-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：339-343,380