体外诱导人脐带华通胶间充质干细胞向内皮细胞分化过程中APJ表达变化

摘要：

目的 研究人脐带华通胶间充质干细胞(human umbilical cord Wharton's Jelly-mesenchymal stem cells,HUW-MSCs)体外诱导向内皮细胞分化过程中表面APJ受体表达的变化,探讨APJ是否可作为鉴定内皮细胞的早期细胞表面标志物.方法 剖宫产取脐带后分别用酶消化和组织贴壁法培养获得脐带华通胶间充质干细胞,用酶消化法获得人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs).取2× 107第2代HUW-MSCs用单克隆APJ-APC荧光抗体标志后行流式分选,测定HUW-MSCs实验前细胞表面表达APJ的水平.实验分3组:诱导组MSCs用含血管内皮细胞生长因子5μg/L、碱性成纤维细胞生长因子10 μg/L、表皮生长因子10 μg/L和10％胎牛血清(fetal bovine serum,FBS) M199培养基培养;共同培养组MSCs先与HUVECs在Transwell 6孔培养板中,用含10％FBS的M199培养5～7d后转入25 cm2培养瓶中继续培养,培养液为含10％FBS的M199和培养1d内皮细胞的M199(2:1)混合培养基;单纯培养组细胞培养基为含10％FBS的M199.培养周期为14 d.分别于第7、10、14天流式检测各组细胞APJ表达水平,同时检测内皮细胞表面APJ水平作为阳性对照.另外于第7、14天检测3个实验组、内皮细胞组、HUW-MSCs组内皮细胞早期标志物CD309表达变化情况,比较各实验组之间APJ与CD309变化趋势.结果 HUW-MSCs流式分选出5×103APJ+-HUW-MSCs,表面表达APJ基本呈阴性.诱导组、共同培养组和单纯培养组细胞形态均较HUW-MSCs有显著改变,诱导组呈圆形、线性、网状,共同培养、单纯培养组细胞呈卵圆形、长梭形.另外,诱导组生长最快,增殖能力最强;单纯培养组次之;共同培养组细胞生长缓慢,增殖能力最弱.第7、10、14天,3组细胞CD309表达分别为诱导组1.8％、2.6％和8.8％,共培养组0.5％、2.5％和4.7％,单纯培养组0.3％、2.1％和2.7％.第7、10、14天各组APJ阳性表达率分别为诱导组0.5％、0.9％和5.2％,共培养组0.4％、0.8％和3.0％,单纯培养组0.2％、0.6％和2.1％.结论 HUW-MSCs表面APJ表达基本呈阴性,HUW-MSCs向内皮细胞诱导分化过程中APJ表达逐渐上调,与内皮细胞早期标志物CD309变化趋势基本一致,可作为早期内皮细胞鉴定的标志物.

关键词：脐带华通胶、间充质干细胞、血管内皮细胞、APJ受体、细胞标志物

所属期刊栏目：3

分类号：R329.2+4;Q254(人体形态学)

资助基金：海军总医院创新培育基金CX201101

在线出版日期：2014-04-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：31-36