用体外表达的血小板膜蛋白GPⅢa偶联Luminex微球检测HPA-1a抗体

摘要：

目的 拟利用体外克隆表达的GPⅢa蛋白作为HPA-1a抗原与Luminex xMAP微球相连,建立和评估用Luminex微球技术检测血清中抗HPA-1a的效果.方法 扩增并克隆GPⅢa蛋白的编码基因ITGB3至真核表达载体,转染中国仓鼠卵巢癌细胞株.利用G418筛选稳定表达细胞株,体外获取并鉴定相应的特异性膜糖蛋白GPⅢa.将重组蛋白通过表面游离氨基和Luminex xMAP微球表面激活的羧基相偶联,再利用偶联后的微球与待测血清反应.利用PE-抗人IgG进行显色,在Luminex-100仪上读取数据并判断结果.结果 ITGB3基因测序为HPA-1aa,将克隆后的GPⅢa重组蛋白偶联Luminex xMAP微球,Luminex微球法检测HPA 1a抗体的灵敏度为滴度1/32(抗体浓度3.125 U/mL).微球技术能特异性鉴别出待测样本的HPA-1a抗体,与MAIPA结果一致,而且与HLA抗体、ABO抗体以及其他HPA血小板系统抗体(HPA-3a、HPA-5b)均不发生交叉反应,说明建用立的Luminex微球技术来检测血小板抗体是可行的.结论 成功获取了重组表达的血小板膜蛋白GPⅢa,并初步建立了Luminex微球检测HPA-1a抗体方法.

关键词：Luminex微球技术、GPⅢa体外重组表达、抗HPA-1a

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资助基金：National Natural Science Foundation of China81371905,81570170;Research Fund for Medicinal and Health Science of Zhejiang Province Department of Health WKJ-ZJ-1509,2014KYB066,2016RCB006,2011ZDA005国家自然科学基金面上项目81371905、81570170;浙江省医药卫生科学研究基金WKJ-ZJ-1509、2014KYB066、2016RCB006、2011ZDA005

在线出版日期：2017-03-31（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：40-44