苯丙氨酸羟化酶基因突变的体外表达分析

摘要：

目的 对苯丙氨酸羟化酶(phenylalanine hydroxylase,PAH)基因7种突变(R270G、P275A、F121L、A156P、E183G、I324N和R408Q)进行功能分析,通过检测其蛋白表达及酶活性的变化,探讨突变效应和致病性质,进一步明确基因型和表型之间的关系.方法 (1)应用体外定点诱变技术构建含有7种突变型PAH cDNA的表达载体,转化感受态大肠杆菌,提取质粒并测序验证.(2)将含有野生型和突变型PAH cDNA的真核表达载体pcDNA3.0瞬时转染COS-7细胞,转染48 h后提取总蛋白,应用免疫印迹法检测蛋白表达量并进行酶活性分析.以野生型PAH作为参照,计算突变型PAH的蛋白表达量、残余酶活性.结果 R270G、P275A、F121L、A156P、E183G、I324N和R408Q突变型PAH的蛋白表达量分别为野生型的10.5％,56.6％,54.3％,8.7％,8.5％,67.3％和85.4％.体外表达酶活性分别为野生型的7.7％,27.6％,19.0％,10.4％,9.1％,50.6％和40.2％.结论 7种突变型PAH的体外表达量及酶活性相对于野生型均有明显降低,证实这7种突变均为引起PAH酶活性降低的致病性突变.

关键词：苯丙酮尿症、苯丙氨酸羟化酶、基因突变、体外表达、残余酶活性

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在线出版日期：2014-02-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：673-677