用SYBR-Green Ⅰ实时荧光PCR结合融解曲线分析法诊断α-地中海贫血

摘要：

目的 建立自动化、高通量、准确快速检测缺失型α-地中海贫血基因型的技术.方法 应用SYBR-Green1进行两个实时荧光聚合酶链反应(real-time fluorescence polymerase chain reaction with SYBR-Green 1,SYBR-PCR),检测左缺(-α4.2)、右缺(-α3.7)等位基因,同时进行融解曲线(dissociation curve,DC)和Tm(melting temperature)值分析.PCR产物重组到pCR2.1,重组子梯度稀释作为模板检测灵敏度,确定两种等位基因型(-α4.2,-α3.7)的检测下限,并对110份DNA样品进行检测.结果 检测-α4.2和-α3.7的PCR产物长度分别为1.65 kb、1.9 kb,Tm分别为(81.5±0.5)℃、(82.5±0.5)℃,检测下限分别为9×102个拷贝、4.3×102个拷贝.该检测技术的灵敏度较常规PCR结合琼脂糖凝胶电泳法高10倍.结论 SYBR-Green1实时荧光PCR结合融解曲线分析及Tm 分析可以灵敏、准确地检测-α4.2、-α3.7、αα(包括αTα)及--SEA 4种等位基因,从而为各种缺失型α-地中海贫血做出基因诊断.该技术具有自动化程度高,不需荧光标记探针,成本低,易质控,防污染,高通量等优点,适于临床推广应用.

关键词：实时聚合酶链反应、SYBR-Green1、融解曲线、α-地中海贫血

所属期刊栏目：24

分类号：R4(临床医学)

在线出版日期：2008-03-03（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：192-195