shRNA-CTGF重组质粒对瘢痕疙瘩Ⅰ型胶原蛋白表达的影响

摘要：

目的 构建pGPU6/GFP/Neo-shRNA-CTGF重组质粒(简称shRNA-CTGF),通过RNA干扰(RNAi)技术对结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)进行体内、体外干预,分析其对瘢痕疙瘩Ⅰ型胶原蛋白(collagen-Ⅰ,COL-Ⅰ)表达的影响.方法 设计并构建特异性shRNA-CTGF重组质粒,RNAi转染体外培养瘢痕疙瘩成纤维细胞(keloid fibroblast,KFB),检测CTGF基因沉默情况及KFB分泌的COL Ⅰ量;将shRNA-CTGF重组质粒对构建的裸鼠瘢痕疙瘩动物模型进行体内转染,检测CTGF基因沉默情况及COL-Ⅰ基因、蛋白表达水平.结果 成功构建了CTGF重组质粒,其在体内、体外环境下均可成功沉默CTGF表达,其抑制率为86.8％和54.1％;RNA体外干扰KFB定向沉默CTGF的同时可显著抑制COL-Ⅰ表达,其mRNA、蛋白水平抑制率分别为76.8％和65.6％;RNA体内干预实验也可显著降低COL-Ⅰ表达,其mRNA、蛋白水抑制率分别为52.7％和48.0％.结论 shRNA-CTGF重组质粒在体外及体内环境下均可成功沉默CTGF基因表达,沉默CTGF能显著降低瘢痕疙瘩中COL-Ⅰ蛋白含量,提示CTGF基因是病理性瘢痕治疗的潜在靶点.

关键词：瘢痕疙瘩、结缔组织生长因子、成纤维细胞、RNA干扰

所属期刊栏目：20

资助基金：江苏省卫生厅资助课题Z200705

在线出版日期：2014-11-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：376-380