皮肤磨削术前后组织中KGF mRNA的表达

摘要：

@@皮肤磨削术在临床上有着较广泛的应用，但是其创面修复的机理至今尚未完全阐明。角质形成细胞生长因子(KGF)由Rubin等在1989年分离鉴定［1］，它特异性地作用于上皮细胞，促进其生长增殖和分化，因而探讨其在术后创面上皮再生过程中的作用很有意义。我们抽提了12例患者手术前后皮肤组织中的总RNA进行RNA印迹法(Northern blot)，结果如下。
一、对象和方法
1.对象：为我科住院病人，供皮区为选磨削术野中较大面积的瘢痕区域，3个月内未患任何皮肤疾患；年龄21～34岁，均为男性；痤疮瘢痕9例，水痘瘢痕2例，外伤性瘢痕1例；病程5～12年。取材方法：标本为全层皮肤，分别在术前和术后24、72、120 h 以切口为中心取全层皮肤，标本离体后立即置液氮中保存，实验前去除缝线用电子天平计重。
2.方法:①试剂：Trizol: Gibco公司产品； Agarose, Prime -α-Gene Labeling System:Promega公司产品。②人KGFcDNA探针的制备：人KGFcDNA片段由中国人民解放军烧伤中心实验室惠赠，含有人KGFcDNA全长585bp中的345bp。③方法：所有标本按文献［2］进行总RNA抽提，吸取l0 μg总RNA(约4.5 μl)，加入2.0 μl 5X甲醛凝胶电泳缓冲液、3.5 μl 37 %甲醛和10.0 μl甲酰胺，在65℃温育15 min，进行甲醛变性凝胶电泳，在20XSSC中经真空转移0.5 h至尼龙膜上，尼龙膜晾干后在80℃烘烤0.5～2h固定，用6XSSC、2XDenhardt和1 %SDS在68℃预杂交1～2 h后，将用α-32P-dATP标记的人KGFcDNA探针加入杂交管在杂交炉中68℃杂交16～24 h，用1XSSC、0.1 %SDS洗膜，再用0.1XSSC、0.1 %SDS洗膜后用X光片放射自显影，于-70℃曝光6 h～2 w。显影后用密度扫描仪分析结果。内参照探针选用甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)。
3.统计学分析：实验结果采用方差分析，再行Newman-Keuls检验。
二、结果
1.12例正常皮肤标本和术后皮肤标本的总RNA经变性凝胶电泳后显示清晰的5S、28S和18S条带(图1)。
2.每份标本约10 ug总RNA用于RNA印迹法，为1例患者术前和术后1、3、5 d皮肤组织中KGF cDNA探针杂交后曝光2 w的显影，1泳道为术前组织杂交显影，2泳道为术后1 d皮肤组织杂交显影，3泳道为术后3 d皮肤组织杂交显影，4泳道为术后5 d皮肤组织杂交显影，术后3 d皮肤组织的KGF杂交条带辉度明显强于术前和术后1 d、5 d的皮肤标本(图2)。

机标关键词：皮肤磨削术、术前后、皮肤组织、杂交、术后、显影、皮肤标本、凝胶电泳、角质形成细胞生长因子、探针、公司产品、方法、瘢痕、印迹法、中心实验室、尼龙膜、甲醛、增殖和分化、统计学分析、人民解放军

所属期刊栏目：7

分类号：R62(整形外科学（修复外科学）)

在线出版日期：2004-01-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共2页

页码：45-46