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摘要: 目的:建立并验证一种基于液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)同时测定脑脊液Aβ1-42、Aβ1-40和Aβ1-38的检测方法,并评价该方法与3种主流检测方法间的一致性。方法:方法建立、验证与一致性评价。以
15N标记的β-淀粉样蛋白作为内标,采用Waters MCX 96孔固相萃取板进行抽提和萃取,收集洗脱液至QuanRecovery MaxPeak 700 μl收集板。在正离子模式下,基于电喷雾离子化的多反应监测模式实现脑脊液Aβ1-42、Aβ1-40和Aβ1-38的同时测定。参考CLSI C62-A和EP-15A3指南对定量限、线性、回收率、精密度、正确度等性能进行方法学评价。收集57例临床检测剩余的脑脊液样本,采用INNOTEST ELISA试剂盒及Lumipulse G和Roche Elecsys全自动化学发光检测系统测定Aβ1-42和Aβ1-40的浓度,采用Passing-Bablok和Bland-Altman法进行不同检测系统间的比对及偏倚评估。
结果:该方法的分析时长为8 min,测定Aβ1-42、Aβ1-40和Aβ1-38的定量限分别为0.1、0.5、0.1 ng/ml,线性范围可覆盖临床实际样本浓度分布;回收率分别为86.2%~93.8%、100.9%~103.9%和103.3%~107.1%;总不精密度分别为4.7%~7.4%、3.5%~4.6%和5.2%~10.9%;Aβ1-42有证参考物质的测定值均在允许不确定度的范围内;携带污染率均≤0.11%。此外,基于该LC-MS/MS法测定的脑脊液Aβ1-42和Aβ1-40的结果与基于INNOTEST ELISA方法和Lumipulse G及Roche Elecsys全自动生化分析仪检测的结果相关性较好,相关系数
r为0.920~0.970,但测定值间存在明显不同。
结论:本研究建立了一种基于LC-MS/MS同时测定脑脊液Aβ1-42、Aβ1-40和Aβ1-38的检测方法,该方法准确、简便,可应用于临床检测。质谱法检测Aβ1-42和Aβ1-40,特别是Aβ1-42,与其他检测系统间的相关性较好但测定值存在显著差异,提示阿尔茨海默症经典标志物检测的一致化和标准化有待改进。
关键词: 色谱法,液相、串联质谱法、β-淀粉样蛋白、脑脊液
所属期刊栏目: 46
资助基金: 高水平医院临床科研业务费2022-PUMCH-B-073,2022-PUMCH-A-138;国家重点研发计划2020YFA0804500/2020YFA0804501;国家自然科学基金82202651;National High Level Hospital Clinical Research Funding2022-PUMCH-B-073, 2022-PUMCH-A-138;National Key Research and Development Program of China2020YFA0804500/2020YFA0804501;National Natural Science Foundation of China82202651
在线出版日期: 2024-01-30(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
页数: 共8页
页码: 814-821
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