10.3760/cma.j.cn114452-20211013-00631
圆盘式微流控芯片在脑梗死患者CALR基因突变检测中的初步应用
目的:建立基于圆盘式(CD)微流控芯片的CALR基因突变的快速检测方法,初步评价其用于脑梗死患者CALR-1和CALR-2基因突变检测的应用价值。方法:基于微流控技术和环介导等温扩增(LAMP)技术建立一个用于CALR-1和CALR-2基因突变同步检测的CD微流控芯片检测平台,并验证该平台检测的灵敏度、特异性、重复性和准确性。前瞻性选取2019年11月至2021年3月复旦大学附属华山医院收治的124例脑梗死患者为脑梗死组,80名健康体检者为对照组。用CD微流控芯片法检测抗凝外周全血样本中的CALR-1和CALR-2基因突变情况,每块芯片同时检测4个样本,同步检测每个样本的3个指标,等温扩增40 min后读取结果。同时采用测序法对检测结果进行验证,比较2种检测结果的一致性。结果:采用CD微流控芯片平台,无需热循环,40 min即可完成样本中3个指标的同步扩增,样本的整个检测过程在60 min内完成。对核酸靶标浓度较高的样本,扩增10 min即可出现阳性信号,收到样本后30 min内报告检测结果。CD微流控芯片法针对CALR-1和CALR-2的检测灵敏度分别为1.0%和0.5%突变负荷浓度,对于其非靶标的核酸样本均未发生任何非特异性扩增,特异性良好,批内重复性和批间重复性的符合率均为100%(20/20)。在脑梗死组中发现2例CALR基因突变,且均为CALR-1突变(L367fs*46),对照组中未发现CALR-1和CALR-2基因突变。CD微流控芯片法与测序法结果一致率为100%(204/204)。结论:CD微流控芯片法用于检测脑梗死患者样本中CALR-1和CALR-2突变具有灵敏度高、特异性好、检测速度快和检测通量高等优势,有助于明确脑梗死患者的病因。
脑梗死、钙网蛋白、基因、微流控芯片、分子诊断技术
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国家自然科学基金81871728;上海市科学技术委员会“科技创新行动计划”20S31902700,21Y11900600;National Natural Science Foundation of China81871728;"Science and Technology Innovation Action Plan"of Shanghai Science and Technology Commission20S31902700, 21Y11900600
2023-05-30(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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