肝癌C/EBPγ的高表达与促进肝癌细胞增殖迁移的相关性研究

摘要：

目的:研究C/EBPγ在肝癌中的表达水平，探讨其对肝癌细胞增殖和迁移的相关性作用。方法:自2018年10月至2019年4月，在上海市松江区中心医院中心实验室，采用体外细胞实验，pLKO.1组为对照组，shg1组和shg2组为干扰组。采用Ocomine人类肿瘤芯片数据库（https：//www.oncomine.org/resource/login.html）和荧光定量PCR比较分析C/EBPγ在肝癌组织及肝癌细胞株中的转录水平。肝癌细胞株HepG2和Hep3B采用DMEM（10% FBS）、THLE-3细胞应用BEBM加生长因子37 ℃、5%CO
2培养。构建shC/EBPγ-pLKO.1腺病毒载体，与包装载体pMD2G、pMDLG/REE和pRSV/Rev共转染293T细胞，空白载体pLKO.1作为对照，12~16 h后收集病毒上清感染HepG2细胞，重复感染4次后加入嘌呤霉素（puromycin 2 μg/mL）选择培养48~72 h，1 μg/mL嘌呤霉素维持培养，显微镜下观察细胞状态。采用生长曲线（0、2、4和6 d）检测增殖；采用无血清培养或加入抗氧化剂NAC培养0.5、1、3、6、12和24 h后，DFH-DA法检测ROS浓度，采用Real-time PCR检测氧化应激相关基因的转录水平；采用划痕实验检测细胞迁移能力。两独立样本比较采用
t检验，三组以上采用单因素方差分析，两两比较采用LSD方法。
结果:Oncomine数据库显示肝癌组织C/EBPγ mRNA水平明显高于正常肝组织，且肝癌分级越高，其基因组中C/EBPγ DNA重复序列拷贝数越高，荧光定量PCR结果显示肝癌细胞株（HepG2和Hep3B）C/EBPγ mRNA水平明显高于正常肝细胞株（THLE-3）。C/EBPγ干扰组4 d（shg1：1.93±0.70；shg2：1.28±0.40）、6 d（shg1：3.05±0.90；shg2：1.31±0.60）增殖显著低于对照组（4 d：6.18±0.80；6 d：22.41±2.56）（
F=1 507.971，
P<0.05）；营养缺乏状态下，干扰组细胞活性氧（ROS）水平与对照组相比明显升高，干扰组氧化应激相关基因（HPRT1、NQO1-tv2和NQO1-tv4）转录水平12 h和24 h明显升高；划痕实验显示72 h干扰组（shg1∶174 922.58±1 239 376.00；shg2∶1 374 656.00±248 882.79）非愈合面积显著高于对照组（66 690.82±1 278 954.00）（
F=39.871，
P<0.05）；加入NAC后，C/EBPγ组6 h细胞增殖率明显提高，0.5、1和3 h细胞活性氧水平显著降低（
F=7.587，4.657，3.903，
P<0.05）。
结论:C/EBPγ在肝癌细胞高表达；降低C/EBPγ表达后，肝癌细胞增殖和迁移明显抑制、活性氧水平和氧化应激相关基因明显升高，提示高表达的C/EBPγ通过降低活性氧水平促进肝癌细胞的增殖和迁移。

关键词：肝癌、增殖、迁移、活性氧

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资助基金：国家自然科学基金青年基金项目81702729;Youth Fund Project of National Natural Science Foundation81702729

在线出版日期：2023-05-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：475-481