采用高分辨熔解曲线分析骨髓增殖性肿瘤患者外周血中钙网蛋白基因突变

摘要：

目的 建立快速、准确、低成本的骨髓增殖性肿瘤(MPN)外周血钙网蛋白(CALR)突变的筛查方法.方法 采集2012至2016年确诊的70例MPN患者的外周血标本,应用PCR结合高分辨熔解曲线(HRM)对CALR突变进行筛查,阳性样本进一步采用Sanger测序和T-A克隆测序技术进行验证;选取CALR野生型DNA及1型和2型突变DNA,每天检测4次持续5 d,分别计算3种扩增片段熔解温度(Tm)的变异系数(CV).检测MPN患者的JAK2基因突变以比较JAK2和CALR突变的相关性.结果 采用PCR-HRM检测,在26例原发性血小板增多症(ET)和24例原发性骨髓纤维化(PMF)中分别筛查出7例(26.9%)和5例(20.8%)患者存在CALR突变,在20例PV中未见该突变;所有HRM 筛查阳性标本都经直接测序或T-A克隆测序证实.HRM 检测CALR野生型DNA及1型和2型突变DNA的 CV分别为1.91%、1.59%和1.43%.对所有样本进行JAK2突变检测发现47例存在JAK2 V617F突变和1例JAK2 exon12突变,未见同一样本JAK2与CALR突变共存.结论 PCR-HRM技术可实现CALR突变的快速筛查,结合测序可用于临床上对MPN患者的快速分子诊断.

关键词：骨髓增殖性疾病、血液肿瘤、钙网蛋白、突变、高分辨率熔解曲线

所属期刊栏目：40

分类号：R73;R3

在线出版日期：2017-07-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：456-459