串联质谱检测干血滤纸片多种溶酶体酶活性方法的建立

摘要：

目的：建立串联质谱法测定干血滤纸片中半乳糖神经酰胺酶（ GALC）、酸性α-葡萄糖苷酶（ GAA）、α-半乳糖苷酶（ GLA）、α-L-艾杜糖苷酸酶（ IDUA）活性。方法方法学建立。收集2013年7月、11月在上海市新华医院新生儿筛查中心进行遗传代谢性疾病筛查的2175份干血滤纸片标本和2012年9月至2014年1月在新华医院儿科就诊的20例溶酶体贮积病（ lysosomal storage disorders，LSDs）患儿干血滤纸片样本。干血滤纸片提取液与酶底物及内标孵育后，经液液和固相萃取，氮气吹干，复溶后串联质谱分析酶反应产物和内标，计算酶活性。评价方法的线性、精密度、准确度和最低检测限；检测2175份新生儿-干血滤纸片样本，0.5～99.5百分位数法确立4种酶活性参考区间；同时检测20例LSDs患儿干血滤纸片样本进行临床验证。结果酶活性测定批内和批间精密度为1.7％～11.8％，批内和批间准确度为85％～115％，产物和内标实测浓度比值与添加的理论浓度比值线性系数为0.997～0.999。 GALC、GAA、GLA和IDUA的最低检测限分别为0.03μmol／（ L· h）、0.09μmol／（L· h），0.12μmol／（L· h），0.16μmol／（L· h）；初步确定新生儿酶活性参考区间分别为GALC[0.51～8.51μmol／（L· h）]，GAA[1.99～22.22μmol／（L· h）]，GLA[1.68～41.59μmol／（L· h）]，IDUA [2.36～19.21μmol／（L· h）]；20例LSDs患儿酶活性明显低于参考区间，串联质谱法能有效检出Krabbe、Pompe、Fabry、MPSⅠ患儿。结论成功建立了串联质谱法检测干血滤纸片中GALC、GAA、GLA、IDUA活性。（中华检验医学杂志，2016，39：761-765）

关键词：溶酶体贮积病、串联质谱法、干燥血斑检测、半乳糖神经酰胺酶、α葡糖苷酶类、α半乳糖苷酶、艾杜糖醛酸酶

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分类号：R91;O65

资助基金：“十二五”国家科技支撑计划项目2012BAI09B04；上海市科委重大课题11dz1950300

在线出版日期：2016-11-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：761-765