重组人中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白线性多表位抗原肽的构建及鉴定

摘要：

目的 探讨应用生物信息学技术对人中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)分子进行B细胞表位的预测的可行性,筛选出具有诊断价值的线性表位分子,构建并表达重组线性多表位抗原肽并进行免疫原性鉴定.方法 2015年7月南京医科大学第二附属医院检验科查询GenBank中NGAL氨基酸序列,利用Predicted、ABCpred、BepiPred、BcePred及Lasergene软件进行B细胞线性表位预测,构建、原核表达预测出的可能表位,通过免疫印迹实验筛选出可与现有NGAL多克隆抗体反应的单表位抗原,最后将获得的单表位抗原构建、表达出多表位抗原肽,并对其进行免疫反应性鉴定.结果 综合预测得出了8个可能的表位,通过构建pET32a-N1～N8原核表达载体,经表达、纯化、免疫印迹筛选,获得了3条具有较强抗原性的表位,随后构建出的多表位原核表达载体pET22b-Ngal_MEP1,获得了可溶性表达的融合蛋白,通过Ni2+亲和柱纯化,成功纯化出了融合蛋白.免疫印迹试验表明,该重组融合蛋白具有较强抗原性.结论构建的NGAL多表位线性抗原肽在原核表达系统中能获得高效可溶性表达,并具有较强免疫反应性,可用于后续抗体制备.

关键词：脂质运载蛋白质类、氨基酸序列、B细胞成熟抗原、表位、免疫印迹法

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资助基金：National Natural Science Foundation of China81472831;Jiangsu Province”s Key Provincial Talents ProgramRC2011081;the Six Talent Peaks Project in Jiangsu Province 2013-WSN-054国家自然科学基金81472831;江苏省科教兴卫工程重点人才资助项目RC2011081;江苏省六大人才高峰项目2013-WSN-054

在线出版日期：2016-07-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：380-385