数字PCR检测非小细胞肺癌患者血浆EGFR基因T790M突变平台的建立

摘要：

目的：建立数字PCR （ dPCR ）检测非小细胞肺癌（ NSCLC ）患者表皮生长因子受体（EGFR）基因T790M突变平台，并评估其基本性能和临床价值。方法方法学建立。收集2014年1月至2015年10月于复旦大学附属中山医院就诊的10例经EGFR-TKI治疗后发生耐药的NSCLC患者。设计EGFR基因T790M突变及野生型的引物及特异性探针，建立dPCR检测EGFR基因T790M突变平台，根据自配不同浓度标准品质粒验证该检测平台空白限、灵敏度和线性以建立最适报告和复检流程。采用dPCR和扩增受阻突变系统（ ARMS）检测患者肺癌组织和血浆标本，卡方检验比较两种方法检测不同标本类型的EGFR基因T790M突变一致性，Pearson相关分析dPCR检测肺癌组织和血浆突变分子丰度的相关性。结果 dPCR检测平台空白限为10拷贝，功能灵敏度为0.01％，且在0.01％～100％范围内线性良好（ Y＝1.226X－3.984，R2＝0.999）。 dPCR和 ARMS检测肺癌组织EGFR基因T790M突变一致性较高（kappa＝0.80），而dPCR检测血浆突变阳性率高于ARMS（50％vs 20％，P＜0.05） Pearson相关分析发现dPCR检测肺癌组织和血浆突变分子丰度高度相关（ R＝0.923，P＜0.05）。结论建立了高灵敏、绝对定量的dPCR检测EGFR基因T790M突变平台，其联合血浆ctDNA能真正实现“液体活检”，对指导耐药后患者个体化治疗有重要价值。（中华检验医学杂志，2016，39：170-175）

关键词：聚合酶链反应、肺肿瘤、受体、表皮生长因子、DNA突变分析

所属期刊栏目：39

分类号：R73;R97

资助基金：国家自然科学基金面上项目81572064；上海市卫生计生系统重要薄弱学科建设项目2015ZB0201@@@@ National Nature Science Foundation of China 81572064； Key Developing Disciplines of Shanghai Municipal Commission of Health and Family Planning 2015ZB0201

在线出版日期：2016-05-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：170-175