采用多重PCR结合高分辨熔解曲线法单管同时检测JAK2V617F突变和JAK2外显子12突变

摘要：

目的 建立能单管同时检测JAK2 V617F突变和外显子12突变的方法.方法 以PC-3细胞株DNA为野生型对照,分别以HEL细胞株DNA和含有JAK2外显子12突变的质粒作为JAK2V617F突变和外显子12突变的阳性对照,采用多重PCR扩增不同DNA片段,并结合高分辨熔解曲线法建立检测JAK2V617F和外显子12突变的联合检测体系.同时选取42例真性红细胞增多症患者,分别采用上述方法和常规方法在外周血中检测JAK2的2种突变.结果 采用多重PCR结合高分辨熔解曲线法成功建立了JAK2突变联合检测体系,能够同时检测JAK2V617F突变和外显子12突变,2种突变的检测灵敏度皆可达5％,2种扩增片段的溶解温度(Tm)的批间及批内变异系数都小于0.01％.42例真性红细胞增多症患者中,发现37例携有JAK2V617F突变,在5例JAK2V617F突变阴性真性红细胞增多症病例中检出2例JAK2外显子12突变.与常规方法相比,结果符合率达到100％.2例JAK2外显子12突变经克隆测序确认突变类型为H538K539delinsL和F537-I546dul10+F547L.结论 该方法可同时在外周血中检测出JAK2的2种突变,将有助于对骨髓增殖性肿瘤尤其是真性红细胞增多症的分子诊断.

关键词：Janus激酶2、外显子、突变、多重聚合酶链反应、高分辨率熔解曲线、红细胞增多症、真性

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分类号：R555.1;R733.3;R259

资助基金：上海市科委重点项目;上海市卫生系统优秀学科带头人培养计划;复旦大学新教师科研启动基金;台州学院医学院校级项目;台州市淑江区科技计划

在线出版日期：2014-04-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：194-197