环介导等温扩增快速检测临床常见曲霉菌方法的建立和应用

摘要：

目的 建立一种环介导等温扩增(LAMP)反应快速检测临床常见曲霉菌方法.方法 根据GenBank上提交的烟曲霉(登录号AY660917)、土曲霉(登录号AF454183)、黄曲霉(登录号AF454158)以及黑曲霉(登录号AF454169)菌的特异28S rRNA基因序列比对后的相对保守区设计特异LA MP引物,分别提取标准曲霉、临床对照菌株以及临床标本DNA,然后以LAMP技术扩增靶基因,通过反应体系中的荧光染料显色作用,直接肉眼观察结果.并将每种曲霉菌约103孢子加入到正常对照血清中模拟临床标本,用LAMP方法进行检测验证.结果 15种非曲霉菌属以及人全血基因组的LAMP和PCR检测结果均为阴性、30份临床非曲霉菌血液感染标本以及10份正常对照血清标本的LAMP检测结果也均为阴性,无非特异反应发生.4种上述标准曲霉菌属的LAMP和PCR检测结果均为阳性；每种曲霉菌的双份共8份模拟临床标本,约含103孢子,经LAMP检测也均为阳性.另对系列每反应管分别含有500、50、5、0.5、0.05 pg模板进行灵敏度分析,LAMP最低检测限可达到0.05～0.5 pg每反应管.结论 LAMP是一种简便、快速、特异和敏感的检测方法,可以用来检测临床和环境标本中的常见曲霉菌属.

关键词：曲霉菌属、核酸扩增技术、敏感性与特异性

所属期刊栏目：37

资助基金：宁波市自然科学基金资助项目2011A610047

在线出版日期：2014-03-31（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：140-143