细粒棘球绦虫亲环素A的重组表达产物的纯化及免疫学鉴定

摘要：

目的 克隆细粒棘球绦虫亲环素A(EgCypA)基因并体外表达纯化该蛋白以评价EgCypA的血清学免疫检测价值.方法 利用生物信息学方法分析细粒棘球绦虫cDNA文库中的EgCypA的理化及生物学特性并设计引物,以细粒棘球绦虫cDNA为模板进行PCR扩增得到EgCypA基因,将该基因克隆到原核表达载体pET28a中,将重组载体导入大肠埃希菌,IPTG诱导该重组菌株表达EgCypA,使用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)明确重组蛋白表达情况;利用Western blot法进行纯化的重组蛋白对细粒棘球绦虫感染血清及其他寄生虫感染血清免疫反应性的鉴定,以此评价该重组蛋白的免疫检测价值.结果 SDS-PAGE显示重组菌株在相对分子质量18 400～25 000表达了大量蛋白,该蛋白的分子量同生物信息学分析的EgCypA的分子量吻合.Western blot结果显示细粒棘球绦虫相关血清与重组蛋白作用后于17 000 ～26 000之问出现了特异性的反应条带,其他寄生虫血清则无此反应.结论 EgCypA具有良好的抗原性,是很有前景的细粒棘球绦虫特异性诊断抗原,可以作为免疫学检查细粒棘球绦虫早期感染的候选分子.

关键词：细粒棘球绦虫、亲环素A、序列分析、重组蛋白质类、印迹法、蛋白质

所属期刊栏目：37

分类号：R383.33;Q78;S852.65

在线出版日期：2014-04-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：56-59