两种蛋白酶对于质谱法测定糖化血红蛋白结果的比较研究

摘要：

目的 探讨两种常用的蛋白水解酶(Glu-C和Lys-C)在质谱法测定糖化血红蛋白(HbAIC)中的差异性研究.方法 病例对照研究.收集2012年2至4月北京朝阳医院门诊和住院患者剩余血液合计200 ml,患者来源中男90例,女70例,年龄20 ～ 60岁,平均年龄(44 ±16)岁.依据国际临床化学协会(IFCC)推荐的基于质谱法的HbAIC参考测量方法处理收集的血液样本(样本编号为:201201、201202、201203),分别应用两种常用的蛋白水解酶(Glu-C和Lys-C)酶解样本中的血红蛋白,使用固相萃取的方法进行质谱前处理,设定最适实验条件后,应用液相色谱串联质谱测定样本中HbAIC的含量.使用Sequest软件对制备的实验样本进行血红蛋白变异体的筛查,所有由液相色谱串联质谱获得的质谱结果都需使用Sequest软件针对人类国际蛋白指数(IPI)数据库搜索RAW文件,检索结果与血红蛋白变异体网站上公布的4种常见的血红蛋白变异体(HbS、HbC、HbD、HbE)进行比对.采用SPSS13.0统计软件和Excel 2003对测量结果进行相关性分析,组间比较采用独立样本t检验.结果 经液相色谱串联质谱检测结果可知,在检测HbAIC浓度时,分别用Glu-C和Lys-C酶解血液样本201201、201202、201203,其中经Lys-C酶解的样本HbAIc检测结果分别为(34.70±2.80)、(51.76±1.60)、(73.39±1.11) mmol/mol,经GIu-C酶解的样本糖化血红蛋白检测结果分别为(33.12±1.48)、(54.54±2.50)、(75.40±3.60) mmol/mol,组间比较差异无统计学意义,两种方法测定结果绘制相关曲线,R2均＞0.995.经Sequest进行人类数据库检索,未筛查出4种常见的血红蛋白变异体的存在.结论 在质谱法检测HbAIc时,应用上述两种常用的蛋白水解酶酶解血液样本时,可以得到较为一致的结果,两种方法检测结果相关性良好.

关键词：血红蛋白A、糖基化、血红蛋白类、丝氨酸内肽酶类、胰蛋白酶、色谱法、高压液相、串联质谱法

所属期刊栏目：36

分类号：R446;TQ925.2;TU111.195

资助基金：国家高技术研究发展计划（863计划）2011AA02A116

在线出版日期：2013-10-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：733-737