利用新型免疫磁珠富集原理检测肺癌患者外周血循环肿瘤细胞

摘要：

目的 建立一种新型免疫磁珠方法,检测肺癌患者外周血中循环肿瘤细胞(CTCs).方法 实验探索性研究.选择经手术切除组织病理确诊为非小细胞肺癌的42例初治患者,其中Ⅰ期7例、Ⅱ期9例、Ⅲ期16例、Ⅳ期10例,健康志愿者20名.将不同数量(50、100、200、500、1000个)的肺癌细胞株(A549)混入2 ml健康成人血标本中以模拟肿瘤患者的血样,对该血样进行红细胞裂解和离心,沉淀所得细胞与经过免疫磁珠标记的上皮细胞黏附分子(EpCAM)的抗体反应,然后经一套自制的检测装置对细胞进行富集和分离,与磁标记的EpCAM抗体反应后的上皮细胞因为磁力的作用被集中在一张玻片上,最后用经典的HE染色鉴定循环肿瘤细胞并计数.计算肿瘤细胞的回收率验证该方法的敏感性,同时检测20名健康志愿者血标本验证该方法的特异性.用上述方法检测42例肺癌患者的CTCs,将检测到的结果根据患者的临床特征进行分组,以卡方检验分析CTCs的检出率与患者的年龄、性别、临床分期、肿瘤大小等临床特征的相关性,同时以直线相关法研究掺入细胞数与回收细胞数的相关性.结果 掺入肿瘤细胞回收试验的回收率在68％～82％之间,掺人细胞间回归方程为y =0.6419X+8.8875,回收的细胞与添加细胞间数量有显著的相关性(相关系数R2=0.9916,P ＜0.05).42例肺癌患者中有18例(42.9％) CTCs阳性,其中,Ⅰ期CTCs检出率为0,Ⅱ期CTCS检出率为11.1％,Ⅲ期CTCs检出率为62.5％,Ⅳ期CTCs检出率为70％.CTCs检测的阳性率与患者的年龄、性别、肿瘤大小均无明显关系(P＞0.05),而与临床分期(TNM)有密切关系(P＜0.05).特异性检测结果为20名健康志愿者外周血标本均未检测到CTCs.结论 新型免疫磁珠富集技术可以有效分离和鉴定肺癌患者外周血中的循环肿瘤细胞,有较高的敏感性和特异性；随着肺癌患者分期增高和肿瘤增大,肺癌细胞发生远处转移逐渐增多,CTCs检出的水平亦增高,对于早期发现肺癌隐形微转移和重新确定肺癌分期具有重要意义,但其临床价值仍需进一步多中心、大样本病例的临床研究加以证实.

关键词：肺肿瘤、肿瘤循环细胞、免疫磁化分离、抗原、肿瘤、细胞黏附分子

所属期刊栏目：36

分类号：R734.2;R979.1;Q503

资助基金：国家自然科学基金30672011

在线出版日期：2013-10-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：727-732