铜绿假单胞菌OprD2基因环介导等温扩增快速检测技术的研究

摘要：

目的 建立肉眼直接判读检测结果的铜绿假单胞菌0prD2耐药基因环介导等温扩增(LAMP)快速检测方法.方法 对2011年12月至2012年6月西南医院微生物室收集的47株铜绿假单胞菌标本进行前瞻性研究.利用LAMP针对铜绿假单胞菌OprD2耐药基因设计两对引物,特异性识别OprD2的6个独立区域来快速扩增.通过在LAMP反应体系中加入核酸染料羟基萘酚蓝(HNB),建立可直接用肉眼判读检测结果的LAMP反应体系,并用该方法检测和分析47株铜绿假单胞菌OprD2耐药基因的分布情况及其与抗生素耐受性的相关性.结果 设计出针对铜绿假单胞菌OprD2耐药基因可直接肉眼判读结果的恒温扩增检测方法,其检测体系的灵敏度为17.414 μg/L,比常规PCR方法(灵敏度:174.14 μg/L)高10倍.49％ (23/47)的菌株OprD2基因缺失,OprD2基因缺失株的头孢噻肟、左氧氟沙星、氨曲南、哌拉西林、亚胺培南和美罗培南耐药率分别为100％(23/23)、57％ (13/23)、48％ (11/23)、48％(11/23)、48％ (11/23)和43％(10/23).与OprD2基因阳性株相比,OprD2基因缺失株的亚胺培南、左氧氟沙星和美罗培南耐药比例明显升高,差异有统计学意义(x2值分别为9.155、4.846、4.037,P值分别为0.002、0.028、0.045).结论 建立了可直接肉眼判读检测结果的铜绿假单胞菌OprD2耐药基因LAMP快速技术.OprD2基因缺失导致铜绿假单胞菌以亚胺培南为主的耐药,因此明确OprD2基因分布状况有助于临床抗菌药物的选用.

关键词：假单胞菌,铜绿、抗药性,细菌

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资助基金：国家”863”重大专项资助项目2011AA02A121;国家科技重大专项资助项目2012ZX10004801-003-006;全军”十二五”重大专项资助项目AWS11C001

在线出版日期：2013-08-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：543-547