新型环状引物荧光定量PCR检测乳腺癌组织HER2基因mRNA表达方法的建立

摘要：

目的 研究建立一种基于实时荧光定量PCR技术和新型环状引物的简捷、准确、廉价、易于标准化检测乳腺癌组织人表皮生长因子受体2(HER2)基因mRNA表达水平的方法,为临床上肿瘤个性化分子靶向药物治疗提供用药指导.方法 设计HER2和内参基因的新型特异性环状引物,通过Excel在乳腺癌组织标本中随机抽取5份标本检测候选内参基因的表达,同时用geNorm、NormFinder和BestKeeper软件筛选和评估乳腺癌组织中稳定表达的内参基因,设置Mg2+浓度和引物浓度梯度对PCR体系进行优化,建立乳腺癌HER2基因mRNA表达水平的新型环状引物Eva Green染料实时荧光定量逆转录(FQ RT)-PCR检测方法(以下简称“自建FQ RT-PCR”法),并对其灵敏度、特异性、稳定性进行评价；同时用自建FQ RT-PCR法与免疫组织化学(IHC)法平行检测2008至2012年厦门大学附属中山医院普外科收集的55份乳腺癌组织和其中32份同一患者匹配的正常组织(距癌组织≥5 cm)中HER2基因的表达水平,并评价自建FQ RT-PCR法对乳腺癌的诊断效能.结果 自建FQ RT-PCR法对HER2基因和核糖体蛋白L37a(RPL37A)基因的最低检测限均为101拷贝/μl,线性范围均为101～ 106拷贝/μl(r=0.997)；HER2和RPL37A基因的高、低浓度标准品(106拷贝/μl和101拷贝/μl)批内变异系数(CV)分别为(5.93±0.57)％和(5.11±0.59)％、(2.49±0.81)％和(2.98±0.97)％；批间CV为(5.76±0.58)％和(7.71±0.61)％、(3.75±0.76)％和(4.40±0.96)％.FQ RT-PCR法与IHC法平行检测87份乳腺癌组织标本HER2基因表达水平,FQ RT-PCR法的敏感度为96.36％(53/55),特异度为78.13％ (25/32),阳性预测值为88.33％ (53/60),阴性预测值为92.59％ (25/27),与IHC检测结果总符合率为89.66％(78/87).且与HIC法具有较高的一致性(Kappa=0.770,P＞0.05).结论 成功建立了FQ RT-PCR检测乳腺癌HER2基因mRNA表达水平的方法,该方法敏感度高、特异度好且快速、价廉,适合临床检验实验室进行肿瘤标本的HER2基因表达检测.

关键词：乳腺肿瘤、基因、erbB-2、受体、erbB-2、聚合酶链反应

分类号：S858.28;R737.9;R512.62

资助基金：福建省科技计划;厦门市科技局项目

在线出版日期：2013-03-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：1000-1005