非小细胞肺癌患者外周血EGFR基因突变富集液相芯片检测方法的建立
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10.3760/cma.j.issn.1009-9158.2012.11.006

非小细胞肺癌患者外周血EGFR基因突变富集液相芯片检测方法的建立

引用
目的 建立灵敏、特异、简便易行、高通量血浆检测非小细胞肺癌(NSCLC)表皮生长因子受体(EGFR)基因突变热点的突变富集液相芯片法(MEL).方法 设计EGFR外显子19 E746-750缺失和外显子21 L858R突变及野生型的特异探针,并偶联到不同荧光编码微球上,用生物素标记的探针反向序列交叉试验验证探针偶联效果后,与突变富集PCR产物互补配对杂交,然后经液相芯片仪检测分析,建立血浆检测EGFR突变的MEL技术.将不同拷贝数突变型与野生型质粒混合做模板,检测MEL的灵敏度与特异性.收集2008年9月至2010年4月在广州医学院第一附属医院住院的201例ⅢB或Ⅳ期NSCLC患者血浆标本,用突变富集PCR和MEL平行检测EGFR外显子19、21突变,同时筛选经2种方法鉴定过的50例标本的PCR产物,经直接测序验证MEL的灵敏度与特异性.并初步分析16例肺腺癌患者血浆EGFR基因突变与吉非替尼治疗疗效的关系.结果 探针成功偶联到不同荧光编码的微球上,且可特异识别相应靶序列,MEL可检出低至10个拷贝的EGFR突变(灵敏度0.1%).201例NSCLC患者中,MEL共检出EGFR外显子19 E746-750缺失和外显子21L858R突变112例(55.7%),与突变富集PCR检出率[58.2%(117/201)]相比,差异无统计学意义(x2=3.20,P>0.05),符合率为97.5%(196/201);直接测序法从50例NSCLC患者中仅检出EGFR突变11例(22.0%),且低于MEL[50.0%(25/50),x2=12.07,P<0.05].经Fisher精确检验,接受吉非替尼治疗的肺腺癌患者中,9例血浆EGFR外显子19突变阳性患者较7例阴性患者具有较高的客观缓解率(P=0.041)和较长的疾病无进展生存期(x2=6.76,P=0.009).结论 成功构建了一种灵敏、特异、快速、高通量的NSCLC血浆诊断EGFR基因外显子19 E746-750缺失和外显子21 L858R突变的MEL检测平台,对指导晚期肺癌患者个体化治疗有重要价值.

癌、非小细胞肺、受体、表皮生长因子、突变、芯片分析技术

R734.2;R473.73;R556.9

国家自然科学基金;广州市教育局科研资助项目

2013-03-22(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)

共7页

986-992

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中华检验医学杂志

1009-9158

11-4452/R

2012,(11)

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