流式微球技术检测血小板特异性自身抗体方法的建立及临床应用

摘要：

目的 建立流式微球技术检测血小板特异性自身抗体的方法,探讨其临床应用价值.方法 用包被抗GP Ⅰ b(单抗SZ2)、抗GPⅡb(单抗SZ22)、抗GPⅢa(单抗SZ21)、抗GPⅡb/Ⅲa(单抗7E3)单克隆抗体的微球捕获血小板特异性抗原抗体复合物,加入FITC标记的羊抗人多克隆抗体,在流式细胞仪上进行检测分析.各取1份SZ2、SZ22、SZ21、7E3抗体阴性和阳性的血小板标本进行批内精密度测定,重复制备20次,上流式细胞仪检测MFI,计算批内CV.各取1份SZ2、SZ22、SZ21、7E3抗体阴性和阳性的血小板标本,每天上流式细胞仪检测1次,共测定8 d,计算批间CV.选取2006年3月至2008年12月苏州大学附属第一医院85例ITP患者、17例NITP患者和50名健康对照者,利用流式微球技术检测4种血小板自身抗体SZ2、SZ22、SZ21、7E3的MFI,利用ROC曲线分析4种血小板自身抗体对诊断ITP的敏感度和特异度.同时采用MAIPA技术对4种血小板自身抗体进行检测,并与流式微球技术检测的敏感度进行比较.结果 SZ2、SZ22、SZ21、7E3抗体阴性标本的批内CV分别为3.26%、2.86%、1.65%、4.94%,阳性标本的批内CV分别为6.16%、4.88%、5.20%、5.85%.SZ2、SZ22、SZ21、7E3抗体阴性标本的批间CV分别为5.86%、4.74%、5.69%、7.56%,阳性标本的批间CV分别为7.53%、5.49%、7.11%、6.25%.ITP组、NITP组和健康对照组SZ2抗体的MFI分别为1.49(0.88～16.24)、1.12(1.00～1.33)、1.01(0.83～1.37),差异有统计学意义(H=36.89,P＜0.01＝,SZ22抗体的MFI分别为1.55(0.84～11.30)、1.13(1.00～1.29)、0.98(0.85～1.24),差异有统计学意义(H=28.41,P＜0.01＝,SZ21抗体的MFI分别为1.50(0.87～11.04)、1.13(0.97～1.32)、1.05(0.85～1.48),差异有统计学意义(H=54.42,P＜0.01＝,7E3抗体的MFI分别为1.51(0.84～9.81)、1.05(0.86～1.13)、1.03(0.74～1.28),差异有统计学意义(H=31.97,P＜0.01＝.流式微球技术检测4种抗体SZ2[临界值(cut-off值)=1.37]、SZ22(cut-off值=1.24)、SZ21(cut-off值=1.48)和7E3(cut-off值=1.28)所对应的AUC分别为0.86、0.90、0.87和0.84,确定的敏感度分别为58.82%(50/85)、52.94%(45/85)、52.94%(45/85)、51.76%(44/85).流式微球技术联合检测4种血小板特异性自身抗体对诊断ITP的敏感度为74.12%(63/85),高于改良间接MAIPA技术的50.59%(43/85),差异有统计学意义(χ2=6.78,P＜0.05＝.结论 流式微球技术可以同时进行4种自身抗体的联合检测,为ITP的临床诊断提供了一种新方法.

关键词：流式细胞术、自身抗体、糖蛋白、血小板减少

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分类号：R4(临床医学)

资助基金：国家自然科学基金资助项目30971287;江苏省自然科学基金资助项目BK2009108;苏州市社会发展基金资助项目SYS201021

在线出版日期：2011-06-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：230-235