呼吸道合胞病毒F蛋白第168～289氨基酸片段的昆虫细胞表达及其抗原性分析

摘要：

目的 研究人呼吸道合胞病毒(RSV)F基因第546～881碱基编码的融合蛋白(即F蛋白)主要抗原性区域第168～289氨基酸片段的抗原性初步探讨其作为诊断抗原的应用价值.方法 用逆转录(RT)-PCR的方法扩增出RSV Long株F基因546～881 bp片段(F'),将其插入到转移载体质粒pBacPAK9中,获得相应的重组质粒pBacRSV F',与线性杆状病毒BacPAK6 DNA(Bsu36 Ⅰ酶切)共转染Sf9昆虫细胞获得重组病毒BacPAK F',并在昆虫细胞中表达.重组蛋白用Ni2+螫合柱亲和层析纯化,用免疫印迹(Western blot,WB)法检测重组蛋白的抗原活性.并用该方法检测33例急性下呼吸道感染患儿血清特异性抗体,同时用间接免疫荧光法检测患儿的鼻咽分泌物中RSV抗原.对两种方法检测标本的阴性率进行比较.结果 重组病毒BacPAK F'在昆虫细胞中表达相对分子质量约13 000的重组蛋白.纯化后的重组蛋白能与特异性抗RSV抗体结合.WB检测33例急性下呼吸道患儿血清特异性抗体,结果显示阳性11例,阳性率为33.3%,免疫荧光法检测结果阳性9例,阳性率为27.3%,2种检测方法阳性率差异无统计学意义(x2=0.29,P>0.05).结论 纯化后的在昆虫细胞中表达的RSV F基因546～881 bp片段编码的融合蛋白片段具有较强的抗原活性,对RSV感染的快速诊断具有一定的临床应用价值.

关键词：呼吸道合胞病毒、病毒融合蛋白质类、杆状病毒科、真核细胞、印迹法、蛋白质

所属期刊栏目：32

分类号：R4(临床医学)

在线出版日期：2009-04-03（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：170-174