人自身抗原Sm B”基因在巴斯德毕赤酵母中的分泌表达

摘要：

目的 通过基因克隆在巴斯德毕赤酵母中表达人自身抗原Sm B”.方法 PCR扩增Sm B”基因,与酵母表达载体pPIC9k重组,构建表达质粒pPIC9k-Sm B”.用电穿孔法转化酵母菌Sm D1168,在MD平板上筛选重组克隆,用G418快速筛选高拷贝转化子,阳性克隆经甲醇诱导表达后,培养上清液用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹法(WB)鉴定,并用免疫酶斑点法和免疫印迹法(immunoblot,IBT)检测与评价分析30例系统性红斑狼疮(SLE)患者、30例混合结缔组织病患者和30名健康体检者血清中抗-Sm B”水平差异.结果 PCR产物约700 bp,与预期657 bp接近,pPIC9k-Sm B”重组阳性克隆测序结果与核酸数据库报道完全一致,双酶切鉴定正确,表达产物Sm B”的相对分子质量约32 000,WB法证实表达产物具有天然Sm B”分子的免疫原性,阴性对照菌未见目的 表达条带.免疫酶斑点法检测阳性率为46.7%(42/90),IBT的检测阳性率为51.1%(46/90);2种方法检测结果一致性较佳(Kappa值=0.911 2,P<0.01).结论 Sm B”在巴斯德毕赤酵母中分泌表达成功,这为Sm B”试剂盒研究奠定了基础.

关键词：毕赤酵母、自身抗原、免疫酶技术

所属期刊栏目：31

分类号：R4(临床医学)

资助基金：福建省青年科技人才创新基金2002J060

在线出版日期：2008-12-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：1178-1181