人纤溶酶原激活物抑制物1基因克隆表达和单克隆抗体的制备及其初步应用

摘要：

目的 克隆人纤溶酶原激活物抑制物1(PAI1)基因,制备和鉴定针对人PAI1的单克隆抗体,以检测PAI1在乳腺癌中的表达.方法 利用逆转录(RT)-PCR方法从人乳腺癌细胞株MDA231总RNA中扩增克隆PAI1基因,构建其原核表达质粒,并表达MS2-PAI1融合蛋白.以纯化的融合蛋白免疫BALB/C小鼠,常规细胞融合和选择性培养,亚克隆筛选出单克隆细胞株,纯化单克隆抗体.利用蛋白印迹(Wb)、免疫组织化学法检测分析PAI1在乳腺癌中的表达水平.结果 克隆了1 209 bp的PAI1基因全长片段.经ELISA双筛,获得2株能稳定分泌抗PAI1单克隆抗体的杂交瘤细胞株,其分泌抗体亚类均为IgG1,且均能特异识别PAI1,并与其他蛋白无交叉反应.Wb结果显示,该抗PAI1单抗与MS2-PAI1融合蛋白以及细胞中的天然蛋白均能结合.免疫组织化学染色结果显示,该单抗与人乳腺癌细胞株MDA231和乳腺癌组织结合后,呈阳性反应.结论 克隆了人PAI1基因,通过原核表达产物制备并纯化了针对PAI1的单克隆抗体.初步检测PAI1能在乳腺癌细胞和乳腺癌组织中表达,这为深入研究PAI1基因功能和检测临床肿瘤组织及体液中的PAI1奠定了可靠基础.

关键词：抗体、单克隆、肿瘤、人纤溶酶原激活物抑制物-1

所属期刊栏目：30

分类号：R4(临床医学)

资助基金：国家高技术研究发展计划863计划2006AA02Z4A8

在线出版日期：2007-12-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：1274-1278