自身淬灭荧光定量PCR检测慢性粒细胞白血病bcr/abl mRNA

摘要：

目的 利用自身淬灭探针技术建立一种能检测慢性粒细胞白血病(CML)bcr/abl融合基因mRNA的实时荧光定量PCR方法,为CML的诊断、疗效观察以及微量残留白血病(MRD)的监测提供有效手段.方法 用逆转录PCR方法(RT-PCR)扩增K562细胞的bcr/abl融合基因,A-T克隆法构建定量标准模板;设计自身淬灭荧光引物(探针),建立自身淬灭荧光定量逆转录PCR方法(FQRT-PCR),并对该方法的线性检测范围、灵敏度、重复性、稳定性进行检测;然后检测临床白血病患者骨髓标本bcr/abl mRNA.结果 建立的FQ-RT-PCR方法可检测10 copies/μl的bcr/abl重组质粒,并能从105个正常细胞中检出1个白血病细胞,该方法的批内、批间变异系数(CV)分别为2.1%、6.1%,线性检测范围为102～109 copies/μl.25例CML患者bcr/abl融合基因mRNA表达量中位数为4.50×104[(0.45～89.00)×104]copies/μg RNA,其中11例慢性期初诊患者bcr/abl mRNA表达量中位数为5.45×104[(2.95～19.30)×104]copies/μg RNA,6例急变期患者bcr/abl mRNA表达量中位数为13.00×104[(4.10～89.00)×104]copies/μg RNA,8例慢性期治疗后复查患者bcr/ablmRNA表达量中位数为2.35×104[(0.45～5.12)×104]copies/μg RNA,CML急变期患者bcr/abl融合基因表达水平与慢性期患者之间差异有统计学意义(q=3.41,P＜0.05).PCR产物经电泳分析,其中21例CML患者为b3a2型,4例CML患者为b2a2型;3例急性淋巴细胞白血病(ALL)患者中,1例有bcr/abl mRNA表达,为b2a2型.结论 所建立的基于自身淬灭探针技术的实时荧光定量PCR检测方法灵敏、特异、重复性好,结果用拷贝数表示,准确可靠,利于标准统一.可广泛用于CML的诊断、疗效观察以及MRD的监测.

关键词：聚合酶链反应、自身淬灭探针、白血病、粒细胞、慢性期、bcr/abl融合基因

所属期刊栏目：30

分类号：R73(肿瘤学)

资助基金：国家自然科学基金30470744

在线出版日期：2007-12-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：1227-1231