Id3-EGFP融合基因表达载体的构建及其在人肺癌细胞A549中的表达

摘要：

目的 构建人分化抑制因子3(Id3)与增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的融合基因表达载体pEGFP/Id3,使Id3-EGFP融合蛋白在人肺癌细胞A549中得到表达.方法 扩增并克隆人Id3 cDNA,构建Id3和EGFP的融合基因表达载体pEGFP/Id3.用脂质体转染技术将pEGFP/Id3导入A549细胞,使Id3-EGFP融合蛋白在A549细胞得到表达.结果 经转化细菌、抽提质粒、酶切鉴定和DNA序列分析证实,Id3基因已正确插入pEGFP-N1中EGFP基因的上游,获得融合基因表达载体pEGFP/Id3.利用脂质体转染技术将pEGFP和pEGFP/Id3转入A549细胞,24 h后,在激光共聚焦荧光显微镜下可观察到表达EGFP的细胞发出绿色荧光,流式细胞术分析表明,转染48 h时EGFP阳性表达细胞率最高,分别可达65.40%和60.50%.pEGFP/Id3转染的A549细胞S期细胞和G2期细胞比例均明显高于pEGFP转染细胞组和未转染细胞组,表明Id3基因的导入可诱导细胞从G1期向G2期发展,从而促进细胞增殖.结论 真核表达载体pEGFP/Id3的成功构建及其在A549细胞中的表达,为研究Id3的细胞定位表达及Id3在细胞生长调控中的作用奠定了实验基础.

关键词：分化抑制因子、肺肿瘤、重组融合蛋白

所属期刊栏目：29

分类号：R73(肿瘤学)

资助基金：江苏省六大人才高峰基金苏卫科教[2005]6号;江苏省卫生厅"135工程"医学重点人才基金RC2002024

在线出版日期：2007-01-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：1111-1115