聚合酶链反应方法检测外周血淋巴细胞HLA-A mRNA方法学的建立及在肾移植中的初步应用

摘要：

目的 通过建立检测宿主外周血淋巴细胞(PBL)表面HLA-AmRNA表达程度的实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-FQ-PCR)方法,检测肾移植患者移植后外周血淋巴细胞表面HLA-A mRNA的表达程度,探讨其在诊断移植后早期排斥反应的发生的价值及机体免疫状态的关系.方法 以6-磷酸葡萄糖脱氢酶(G6PDH)作内参照,用Taqman探针荧光定量技术,建立检测PBL HLA-A mRNA的RT-FQ-PCR方法;并检测35例随访移植患者的不同时间的60个标本和60名正常人的阈循环数(Ct),然后用REST软件分析PBL HLA-A mRNA的表达水平.结果 正常人和51个移植标本的PBL HLA-A mRNA对G6PDH的相对表达量分别为0.036±0.012和0.026±0.015(双侧t=1.981,P＜0.05),提示服用免疫抑制药(目前临床用药剂量均偏大)后患者PBL HLA-A mRNA表达减弱,机体免疫状态低,无排斥反应发生但易导致感染、肿瘤等并发症的产生;其中9个移植标本的PBL HLA-A mRNA对G6PDH的相对表达量为0.042±0.017(双侧t=2.002,P＜0.05),提示较其他51例移植标本患者PBL HLA-A mRNA表达增强的患者,经病例回访查询发现该5例移植患者在这期间有排斥反应(根据临床表现、肾功能检查、影像学及核医学检查的临床排斥反应期)的发生,其中1例在移植后6个不同时间的标本显示2次有增高,每次经治疗后均降低.结论 建立的宿主PBL HLA-A mRNA RT-FQ-PCR检测方法简便、特异、重复性好、可信度高,可用于肾移植后PBLHLA-A mRNA表达水平的检测,评估机体的免疫状态,预测排斥反应的发生.

关键词：淋巴细胞、HLA-A抗原、肾移植、聚合酶链反应、移植物排斥、RNA、信使

所属期刊栏目：29

分类号：R6(外科学)

在线出版日期：2007-01-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：1074-1078