荧光定量逆转录聚合酶链反应在前列腺特异性抗原基因检测中的应用价值

摘要：

目的利用Taqman技术,建立荧光定量逆转录聚合酶链反应(FQ-RT-PCR)技术,对前列腺癌病人外周血中前列腺特异性抗原基因(PSAmRNA)进行定量检测.方法在PSA基因的外显子2和3之间设计一对引物和一条Taqman探针;优化反应体系的条件,以不同LNCaP细胞含量为标准品和其循环阈值(Ct值)制作标准曲线,检测外周血中PSAmRNA含量;对本方法进行方法学评价及初步临床应用评价.结果成功建立了FQ-RT-PCR检测PSAmRNA技术,本方法最低检测限为每毫升全血5个LNCap细胞,线性范围为5～108细胞/ml, 批内和批间变异系数分别为9.5%～14.3% 和 15.2%～20.1%,扩增产物克隆和测序分析显示本扩增片段为PSAmRNA序列的特异性片段.初步临床研究显示,10例经ECT,检查证实骨转移的前列腺癌患者的外周血均检到PSAmRNA, 其含量变化为8～104细胞/ml,健康男性、女性各5名外周血中PSAmRNA含量均小于本法最低检测限.结论荧光定量逆转录聚合酶链反应检测PSAmRNA具有灵敏、特异、简便、结果数据化等特点, 该方法可为前列腺癌微转移诊断、预后判断、指导治疗等奠定良好基础,同时也为其他肿瘤患者外周血中肿瘤细胞检测提供了方法学启示.

关键词：前列腺、基因、聚合酶链反应

所属期刊栏目：27

分类号：R73(肿瘤学)

资助基金：浙江省自然科学基金 SZJ02003

在线出版日期：2004-05-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：148-151