从单个细胞扩增靶基因片段的技术

摘要：

目的建立从人的单个细胞扩增特定靶基因片段进行基因诊断的技术.方法利用显微操作技术挑取单个纤维母细胞,各置于0.2 ml簿壁反应管的裂解液中,合成针对抑癌基因P53第5～9外显子(e)的引物,运用15mer高度随机引物或一个特异引物进行单个细胞的整个基因组DNA或特异靶片段的预扩增,再以其为模板进行巢式聚合酶链反应(PCR)扩增P53基因第e5～9的1 900 bp片段及含第5,6外显子的580 bp片段.并用ABI-377测序仪测定其序列.结果运用稀释至0.01 ng的基因组DNA扩增1 900 bp片段,优化PCR的条件.分别从30个单个纤维母细胞扩增上述1 900 bp片段,10个获得1 900 bp片段,成功率为33%.扩增580 bp片段,则阳性率可达60%.序列分析证明确为人P53基因第5,6外显子序列.结论运用本实验室建立的技术可从人的单个细胞扩增特定靶基因片段,并测定其序列,作出基因诊断.

关键词：巢式聚合酶链反应、基因扩增、单细胞

所属期刊栏目：25

分类号：R446(诊断学)

资助基金：北京市自然科学基金JS96004

在线出版日期：2004-01-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：85-87