10.3760/j:issn:1009-9158.2001.02.014
两种DNA探针杂交检测结核分枝杆菌的研究
@@ 我们比较了结核分枝杆菌(结核菌)基因组DNA及其聚合酶链反应(PCR)产物的灵敏度与特异性,并对结核病人痰标本进行了检测。
一、材料和方法
1.菌种来源:24种分枝杆菌来自中国药品生物制品检定所,11种非分枝杆菌来自中国科学院微生物学研究所。
2.标本收集:90份痰标本来自本院结核科住院病人,经X线检查、临床表现确诊。30份非结核病人痰标本来自本院呼吸科、肿瘤科及北京大学第三医院呼吸科住院病人。
3.标本DNA提取:采用本室研制的标本前处理试剂盒。
4.引物:引物a:根据文献[1]报道设计。扩增产物为350 bp,5′-GAAGTCGTAACAAGC,5′-CAAGGCATCCACCAT;引物b:根据引物a扩增产物测序结果,选择碱基差异性设计,扩增产物为250 bp,5′-CGGCAGCGTATCCATTGATG,5′-CACGAAAACGCCCCAACTG。
5.PCR扩增:引物a扩增参数:94℃,1 min;45℃,3 min;72℃,1 min;循环30次,最后72℃延伸10 min。引物b扩增参数:94℃,1 min;61℃,1 min;72℃,1 min;循环30次,最后72℃延伸10 min。扩增产物经2%琼脂糖凝胶电泳,紫外灯下观察结果。
探针杂交检测、扩增产物、引物、结核分枝杆菌、痰标本、住院病人、结核病人、标本前处理试剂盒、琼脂糖凝胶电泳、生物制品检定、聚合酶链反应、呼吸科、中国科学院、生物学研究、材料和方法、循环、设计、临床表现、观察结果、参数
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R446(诊断学)
2004-01-15(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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