液相杂交技术在聚合酶链反应酶联免疫检测的应用

摘要：

目的采用液相杂交技术，简化核酸杂交过程，建立乙肝病毒（HBV）的液相杂交的聚合酶链反应-酶联免疫检测（PCR-ELISA）方法。方法将5′端标记生物素的PCR扩增产物与5′端标记地高辛的探针呈液相混合，90℃ 2 min，55℃ 1 min杂交。杂交后产物被链霉亲和素酶标板固定，经酶标记抗地高辛标记抗体结合、显色。结果液相杂交酶联免疫检测条件优化：探针浓度3 pmol/次, 酶标记抗体稀释度1∶1000。液相杂交时间3 min，固相杂交时间120 min，但其检测结果无明显差别。检测灵敏度1×104拷贝/ml, 34份HBsAg(+)，HBeAg(+)，抗HBc(+)标本的阳性检出率为97.1%;34份HBsAg(+)，抗HBe(+)，抗HBc(+)标本的阳性检出率67.7% ；17份HBsAg(+)、抗HBc(+)阳性检出率58.8%；其他免疫检测指标组合标本为34份(5.9%)；34份献血员标本均为阴性。结论在PCR-ELISA中使用液相杂交技术可使实验操作简便、快速，更适合临床实验室实际应用。

关键词：肝炎病毒、乙型、核酸杂交、聚合酶链反应、酶联免疫检测

所属期刊栏目：24

分类号：R446(诊断学)

资助基金：上海市高等学校科技发展基金99B01

在线出版日期：2004-01-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：34-36