乙型肝炎病毒X蛋白促进磷脂酶A 2受体表达加重足细胞焦亡的机制
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10.3760/cma.j.cn112137-20230215-00213

乙型肝炎病毒X蛋白促进磷脂酶A 2受体表达加重足细胞焦亡的机制

引用
目的:探讨乙型肝炎病毒X蛋白(HBx)诱导足细胞膜上M型磷脂酶A 2受体(PLA 2R)表达增加对乙型肝炎病毒相关性肾炎(HBV-GN)中足细胞焦亡的影响及其作用机制。 方法:采用转染HBx基因至人肾脏足细胞内的方法模拟HBV-GN发病过程,并将足细胞分为以下8组:正常对照+分泌型磷脂酶A 2-ⅠB(sPLA 2-ⅠB)组、空白质粒+sPLA 2-ⅠB组、HBx组、HBx+sPLA 2-ⅠB组、HBx+sPLA 2-ⅠB+PLA 2R对照siRNA组、HBx+sPLA 2-ⅠB+PLA 2R-siRNA组、HBx+sPLA 2-ⅠB+ROS对照siRNA组及HBx+sPLA 2-ⅠB+ROS-siRNA组。电镜下观察足细胞形态,荧光显微镜下利用免疫荧光染色观察足细胞膜上PLA 2R的表达,流式细胞术分析足细胞焦亡率及活性氧(ROS)表达,实时荧光定量PCR及Western 印迹测定PLA 2R、核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、胱天蛋白酶1(caspase-1)、白细胞介素(IL)-1β及IL-18 mRNA及蛋白的表达情况。 结果:与正常对照组相比,体外转染HBx质粒后足细胞膜上M型PLA 2R表达增加(4.07±0.41比1.01±0.17, P<0.001),电镜及胱天蛋白酶荧光染料抑制物/碘化丙啶(FLICA/PI)双染细胞焦亡检测提示过表达的PLA 2R与其配体sPLA 2-ⅠB结合后足细胞损伤加重,焦亡程度增加(20.22%±0.36%比7.86%±0.28%, P<0.001),且PLA 2R过表达时ROS(4 324 515±222 764比12 920±46, P<0.001)、NLRP3(48.30±2.73比1.00±0.11, P<0.001)、ASC(4.02±0.84比1.01±0.15, P<0.001)、caspase-1(3.99±0.42比1.00±0.11, P<0.001)、IL-1β(9.08±0.75比1.00±0.09, P<0.001)及IL-18(19.20±0.70比1.00±0.02, P<0.001)表达水平增加。相反,加入PLA 2R-siRNA或ROS-siRNA敲低相关物质表达后,足细胞损伤减轻,焦亡程度下降,下游信号通路相关基因NLRP3、ASC、caspase-1、IL-1β及IL-18基因表达均减少(均 P<0.01)。 结论:HBx可能通过上调PLA 2R靶向ROS-NLRP3信号通路促进HBV-GN中足细胞焦亡。

肾炎、肝炎病毒,乙型、乙型肝炎病毒相关性肾炎、磷脂酶A 2受体 、焦亡

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2023-07-11(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)

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