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摘要: 目的:探讨Orai1介导钙池操纵的钙内流(SOCE)在脓毒症小鼠CD4
+ T细胞免疫功能损害中的作用。
方法:采用清洁级雄性Balb/c小鼠建立盲肠结扎穿孔(CLP)脓毒症模型,分别于术后1、3、5 d 处死小鼠,无菌留取脾脏,免疫磁珠法分选CD4
+ T细胞,Western印迹法检测各组脾脏CD4
+ T细胞Orai1蛋白表达,流式细胞术检测SOCE,流式细胞术检测CD4
+ T细胞凋亡,CCK-8细胞计数试剂盒检测CD4
+ T细胞增殖,酶联免疫吸附法(ELISA)检测干扰素(IFN)-γ和白细胞介素(IL)-4水平。然后调节Orai1蛋白的表达,实验分为4组,sham组、CLP3组、Orai1下调组(Orai1-down组)、Orai1上调组(Orai1-up组),进一步检测小鼠脾脏CD4
+ T细胞SOCE和免疫功能。
结果:sham组脾脏CD4
+ T细胞Orai1蛋白的相对表达量为1.03±0.16,与sham组相比,CLP组的Orai1蛋白水平明显降低(
F=19.64,
P=0.000 5)。与sham组相比,CLP组SOCE水平明显降低(
F=30.01,
P=0.001)。sham组的CD4
+ T细胞早期和晚期凋亡比率为8.7%±1.5%,与sham组相比,CLP组明显升高(
F=32.29,
P=0.000 1)。与sham组相比,CLP组小鼠脾脏CD4
+ T细胞增殖能力明显降低,差异有统计学意义(
F=7.26,
P=0.001 8)。与sham组相比,CLP组小鼠脾脏CD4
+ T细胞分泌IFN-γ和IL-4的能力均明显降低,差异均有统计学意义(
F=19.690、6.183,均
P<0.05)。与sham组相比,CLP组IFN-γ/IL-4比值变小(
F=11.23,
P=0.003 1)。与CLP3组相比,Orai1-down组CD4
+ T细胞SOCE的水平明显下降,早期和晚期凋亡比率明显升高,脾脏CD4
+ T细胞增殖能力显著下降,分泌IFN-γ和IL-4下降,IFN-γ/IL-4值下降,差异均有统计学意义(
t=4.819、7.952、2.988、28.760、3.140、7.670,均
P<0.05);而Orai1-up组则均获得相反的结果,差异亦均有统计学意义(
t=2.983、6.796、9.390、19.670、3.692、15.870,均
P<0.05)。
结论:Orai1介导SOCE减轻脓毒症小鼠CD4
+ T细胞免疫功能障碍。
关键词: 脓毒症、Orai1、钙池操纵的钙内流、淋巴细胞、免疫功能
所属期刊栏目: 101
资助基金: 国家自然科学基金81772112,81871583;浙江省“十三五”中医药重点专科(急诊科)Y20170185,Y20170177;温州市科技计划项目81772112, 81871583;National Natural Science Foundation of ChinaY20170185, Y20170177;The Key Specialty of Traditional Chinese Medicine of Zhejiang Provincial in the 13th Five-Year Plan Period Emergency Medicine;Wenzhou Municipal Science and Technology Project
在线出版日期: 2023-05-30(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
页数: 共7页
页码: 504-510
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