Orai1蛋白介导钙池操纵的钙内流在脓毒症小鼠CD4 +T细胞免疫功能损害中的作用

摘要：

目的:探讨Orai1介导钙池操纵的钙内流（SOCE）在脓毒症小鼠CD4
+ T细胞免疫功能损害中的作用。
方法:采用清洁级雄性Balb/c小鼠建立盲肠结扎穿孔（CLP）脓毒症模型，分别于术后1、3、5 d 处死小鼠，无菌留取脾脏，免疫磁珠法分选CD4
+ T细胞，Western印迹法检测各组脾脏CD4
+ T细胞Orai1蛋白表达，流式细胞术检测SOCE，流式细胞术检测CD4
+ T细胞凋亡，CCK-8细胞计数试剂盒检测CD4
+ T细胞增殖，酶联免疫吸附法（ELISA）检测干扰素（IFN）-γ和白细胞介素（IL）-4水平。然后调节Orai1蛋白的表达，实验分为4组，sham组、CLP3组、Orai1下调组（Orai1-down组）、Orai1上调组（Orai1-up组），进一步检测小鼠脾脏CD4
+ T细胞SOCE和免疫功能。
结果:sham组脾脏CD4
+ T细胞Orai1蛋白的相对表达量为1.03±0.16，与sham组相比，CLP组的Orai1蛋白水平明显降低（
F=19.64，
P=0.000 5）。与sham组相比，CLP组SOCE水平明显降低（
F=30.01，
P=0.001）。sham组的CD4
+ T细胞早期和晚期凋亡比率为8.7%±1.5%，与sham组相比，CLP组明显升高（
F=32.29，
P=0.000 1）。与sham组相比，CLP组小鼠脾脏CD4
+ T细胞增殖能力明显降低，差异有统计学意义（
F=7.26，
P=0.001 8）。与sham组相比，CLP组小鼠脾脏CD4
+ T细胞分泌IFN-γ和IL-4的能力均明显降低，差异均有统计学意义（
F=19.690、6.183，均
P<0.05）。与sham组相比，CLP组IFN-γ/IL-4比值变小（
F=11.23，
P=0.003 1）。与CLP3组相比，Orai1-down组CD4
+ T细胞SOCE的水平明显下降，早期和晚期凋亡比率明显升高，脾脏CD4
+ T细胞增殖能力显著下降，分泌IFN-γ和IL-4下降，IFN-γ/IL-4值下降，差异均有统计学意义（
t=4.819、7.952、2.988、28.760、3.140、7.670，均
P<0.05）；而Orai1-up组则均获得相反的结果，差异亦均有统计学意义（
t=2.983、6.796、9.390、19.670、3.692、15.870，均
P<0.05）。
结论:Orai1介导SOCE减轻脓毒症小鼠CD4
+ T细胞免疫功能障碍。

关键词：脓毒症、Orai1、钙池操纵的钙内流、淋巴细胞、免疫功能

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资助基金：国家自然科学基金81772112，81871583;浙江省“十三五”中医药重点专科（急诊科）Y20170185，Y20170177;温州市科技计划项目81772112, 81871583;National Natural Science Foundation of ChinaY20170185, Y20170177;The Key Specialty of Traditional Chinese Medicine of Zhejiang Provincial in the 13th Five-Year Plan Period Emergency Medicine;Wenzhou Municipal Science and Technology Project

在线出版日期：2023-05-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：504-510