低剂量全氟辛酸对人横纹肌肉瘤细胞增殖和迁移及侵袭的影响

摘要：

目的 观察全氟辛酸(PFOA)对体外培养的人恶性胚胎横纹肌瘤(RD)细胞的增殖、迁移及侵袭的影响,并初步探讨其作用机制.方法 应用不同浓度PFOA作用体外培养的RD细胞一定时间后,使用细胞增殖与毒性检测试剂盒(CCK8)检测细胞活力并确定PFOA作用浓度;使用该浓度PFOA处理RD细胞,通过划痕实验和细胞体外侵袭(transwell)实验评估细胞的侵袭和迁移能力,流式细胞术检测细胞周期的分布,实时荧光定量PCR(qPCR)检测相关基因mRNA表达差异,蛋白质免疫印迹法(WB)检测相关蛋白水平表达差异.结果 CCK8结果 显示不同浓度PFOA作用RD细胞72 h后,呈现出低浓度PFOA(1、10、50、100 μmol/L)促进、高浓度PFOA(250、500 μmol/L)抑制细胞增殖的趋势,与对照组相比,50 μmol/L PFOA组对RD细胞的增殖呈现促进作用(P＜0.001).流式细胞术结果显示PFOA (50 μmol/L)作用RD细胞72 h后,G0/G1期细胞差异无统计学意义,S期细胞减少,G2/M期细胞增加.S期及G2/M期相对比例在PFOA组及对照组之间差异均有统计学意义(均P＜0.01).qPCR结果显示在mRNA水平,对照组与PFOA(50 μmol/L)处理组的细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶2(CDK2)相对表达量分别为0.97±0.07、2.64±0.11,差异有统计学意义(t=12.60,P＜0.001);细胞周期蛋白E2 (cyclin E2)相对表达量分别为1.33±0.17、3.35±0.22,差异有统计学意义(t=7.42,P＜0.001);WB结果显示,对照组与PFOA(50 μmol/L)处理组的CDK2相对表达量分别为0.35±0.01、0.84±0.03,差异有统计学意义(t=14.60,P＜0.001);cyclin E2相对表达量分别为0.67±0.04、0.86±0.01,差异有统计学意义(t=4.88,P＜0.01).p21、p53在mRNA及蛋白表达差异均无统计学意义(均P＞0.05).划痕实验结果显示,PFOA (50 μmol/L)组的划痕愈合速度明显加快,其相对迁移面积大于对照组(P＜0.001);transwell侵袭试验显示与对照组相比,PFOA (50 μmol/L)组细胞穿过小孔数增多(t=54.40,P＜0.001),侵袭能力明显增强.qPCR结果显示在mRNA水平,对照组与PFOA(50 μmol/L)处理组的波形蛋白(vimentin)相对表达量分别为0.71 ±0.03、2.53±0.16,差异有统计学意义(t=1 1.00,P＜0.001);基质金属蛋白酶2(MMP2)相对表达量分别为1.09±0.04、10.73±1.20,差异有统计学意义(t=8.04,P＜0.001).WB结果显示,对照组与PFOA(50 μmol/L)处理组的vimentin相对表达量分别0.55±0.06、0.81±0.01,差异有统计学意义(t=4.50,P＜0.05);MMP2相对表达量分别为0.64±0.04、1.03±0.13,差异有统计学意义(t=2.94,P＜0.05).结论 低剂量PFOA(50 μmol/L)暴露可通过上调细胞周期相关蛋白及MMP2、vimentin促进横纹肌肉瘤细胞的增殖、侵袭转移.

关键词：横纹肌肉瘤、细胞周期、肿瘤侵袭

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在线出版日期：2019-05-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：850-856