Raf激酶抑制蛋白对恶性黑色素瘤细胞增殖、迁移的影响及其机制

摘要：

目的 探讨Raf激酶抑制蛋白(RKIP)在体外对恶性黑色素瘤细胞增殖、迁移能力的影响及其机制.方法 利用重组慢病毒转染技术构建小鼠恶性黑色素瘤细胞株B16的RKIP过表达及调低的稳定转染株,并将其设立为RKIP过表达组和RKIP调低组,以未经任何处理的小鼠恶性黑色素瘤B16细胞为空白对照组;通过细胞增殖/毒性检测试剂盒(CCK-8)法与细胞划痕实验检测各组细胞的增殖活性及迁移能力,利用实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)检测细胞周期蛋白D1 (CyclinD1)、钙离子依赖的细胞黏附素、Ki-67、基质金属蛋白酶(MMP)-9、MMP-13、MMP-2及磷脂酰乙醇胺结合蛋白I(PEBP-1)的相对表达量;Western印迹检测各组细胞间RKIP表达差异及其在核因子(NF)-κB信号通路的蛋白相对表达量.结果 RKIP过表达组细胞增殖率显著低于空白对照组(0.794±0.038比1.200±0.081) (P＜0.001),而RKIP调低组细胞的增殖率与空白对照组差异无统计学意义(1.077±0.084比1.200±0.081)(P＞0.05);RKIP过表达组细胞的迁移能力显著低于空白对照组(P＜0.001),而RKIP调低组细胞的迁移能力显著高于空白对照组(P＜0.001);除RKIP调低组与空白对照组PEBP-1相对表达量差异无统计学意义(P＞0.05)外,其余检测基因相对表达量在RKIP过表达组均显著低于空白对照组,RKIP调低组均显著高于空白对照组(均P＜0.001).RKIP过表达组中磷酸化的P65(p-P65)蛋白相对表达量显著低于空白对照组(0.080±0.000比0.236±0.000),而RKIP调低组中p-P65蛋白相对表达量则显著高于空白对照组(1.139±0.001比0.236±0.000)(均P＜0.001).结论 RKIP过表达可以抑制恶性黑色素瘤细胞的增殖及迁移,其可能与调控NF-KB信号通路相关蛋白P65的磷酸化有关.

关键词：黑色素瘤、Raf激酶类、细胞增殖、细胞运动、NF-KB

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资助基金：四川省科技计划项目2017FZ0048Science and Technology Projects of Sichuan Province 2017FZ0048

在线出版日期：2019-04-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：616-621