10.3760/cma.j.issn.0376-2491.2018.34.015
不同patatin样磷脂酶结构域蛋白3I148M基因型对肝癌细胞增殖的影响
目的 探讨含patatin样磷脂酶结构域蛋白3(PNPLA3)野生型148I/I及突变型148M/M对人肝癌细胞株HepG2增殖的影响及相关机制.方法 构建PNPLA3148I/I及148M/M慢病毒稳定过表达及阴性对照细胞株即过表达PNPLA3野生型148I/I HepG2细胞、过表达PNPLA3突变型148M/M HepG2细胞和阴性病毒对照(NC)HepG2细胞.细胞增殖/毒性检测试剂盒(CCK8)检测不同细胞株的活力,5-乙炔基-2′脱氧尿苷(EdU)法检测细胞增殖情况,Western印迹检测磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)信号通路的蛋白水平,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测与增殖相关的PNPLA3代谢产物花生四烯酸(AA)、溶血磷脂酸(LPA),实时荧光定量PCR检测PNPLA3相关增殖指标前列腺素过氧化物合酶2(PTGS2)和过氧化物酶体增殖物激活受体 γ辅助活化因子1α(PGC1α)mRNA表达水平.结果 过表达PNPLA3148M/M组比过表达PNPLA3148I/I组细胞活力高,差异有统计学意义[(98.02±1.29)%比(71.51±2.89)%,P<0.001],与NC相比差异无统计学意义[(98.02±1.29)%比(100±2.61)%,P=0.181].过表达PNPLA3148M/M组细胞增殖活性较过表达PNPLA3148I/I组高,差异有统计学意义(46.46±1.83比35.96±2.65,P=0.001),与NC组相比差异无统计学意义(46.46±1.83比46.64±7.33,P=0.965).过表达PNPLA3148M/M组较过表达PNPLA3148I/I组PGC1αmRNA表达水平,总PI3K、PThr-308蛋白激酶B(PThr-308 AKT)、PSer2448-哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(PSer2448-mTOR)、PGC1α蛋白表达水平增高,但AA和LPA水平以及PTGS2 mRNA表达水平两组差异无统计学意义.结论 PNPLA3148M/M细胞增殖作用较PNPLA3148I/I强.
脂肪肝、非酒精性、HepG2细胞、基因型、patatin样磷脂酶结构域蛋白3、细胞增殖
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国家自然科学基金81370909 National Natural Science Foundation of China 81370909
2018-09-19(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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