TLR4-PI3K-Rac1通路对巨噬细胞骨架及吞噬功能的影响

摘要：

目的 探讨Toll样受体4(TLR4)-磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)-Ras相关C3肉毒素底物1(Rac1)信号通路对巨噬细胞骨架重排及吞噬功能的影响.方法 小鼠巨噬细胞系RAW264.7分为空白组、阴性对照组及TLR4-RNA干扰(RNAi)组.将携带TLR4基因短发卡RNA(shRNA)的慢病毒颗粒及携带无意义对照序列慢病毒颗粒分别转染至TLR4-RNAi组及阴性对照组,空白组不进行转染.Western印迹法检测TLR4基因沉默效率.实时荧光定量PCR检测各组细胞PI3K、Rac1 mRNA的表达,Western印迹法测各组细胞PI3K、磷酸化Rac1(p-Rac1)、Rac1蛋白表达;激光共聚焦显微镜观察细胞骨架变化.流式细胞术检测各组细胞吞噬异硫氰酸荧光素标记的大肠杆菌(FITC-E.coli)的能力,用平均荧光强度(MFI)和吞噬细胞百分比(吞噬％)表示.结果 TLR4-shRNA慢病毒可成功转染RAW264.7细胞,转染效率为80％ ～90％,TLR4基因沉默效率为(63±4)％.沉默TLR4后,TLR4-RNAi组TLR4 mRNA和蛋白相对表达量(0.20±0.03、0.37±0.04)、PI3K mRNA和蛋白相对表达量(0.64±0.06、0.75±0.06)以及Rac1 mRNA、蛋白和p-Rac1蛋白相对表达量(0.75±0.04、0.76±0.01、0.74±0.05)均显著低于阴性对照组和空白组(均P<0.01).细胞骨架变化:沉默TLR4后细胞伪足伸出短少、僵硬,吞噬FITC-E.coli能力较弱,空白组和阴性对照组细胞伪足伸出良好,吞噬FITC-E.coli能力强.吞噬FITC-E.coli能力:TLR4-RNAi组MFI和吞噬％[(7453±564)、(70.20±2.27)％]均显著低于空白组和阴性对照组(均P<0.01).基础状态下及沉默TLR4后,TLR4、PI3K、Rac1 mRNA、蛋白表达与MFI、吞噬％均呈正相关(均P<0.05).结论 TLR4-PI3K-Rac1通路参与巨噬细胞骨架的重排,降低巨噬细胞的吞噬能力.

关键词：巨噬细胞、Toll样受体4、细胞骨架、吞噬作用

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资助基金：国家自然科学基金81670033;甘肃省重点研发计划17YF1FA129National Natural Science Foundation of China81670033;the Key Research and Development Program of Gansu Province of China17YF1FA129

在线出版日期：2018-09-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：2743-2748