替米沙坦对3T3-L1脂肪细胞过氧化物酶体增殖物激活受体 γ信号通路的影响

摘要：

目的 观察替米沙坦对3T3-L1脂肪细胞过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)信号通路的影响,探讨替米沙坦延缓2型糖尿病病程的作用机制.方法 诱导3 T3-L1前脂肪细胞至80％成熟(对照组),加入50 ng/ml肿瘤坏死因子α(TNF-α)刺激1 h(TNF-α组),分别以0.1、5、10μmol/L替米沙坦加入培养基干预24 h,即T0.1,T5和T10组.应用Western印迹检测PPARγ及其磷酸化水平、细胞周期依赖性蛋白激酶5(CDK5)表达变化;酶联免疫吸附测定(ELISA)检测培养基中脂联素含量.短发夹RNA(shRNA)沉默未分化3T3-L1的PPARγ,筛选PPARγ丝氨酸突变型3T3-L1细胞系即S273A、S112A、S186A,以进一步确定磷酸化位点.shRNA沉默CDK5,油红O染色、异丙醇萃取检测分化效率,以10μmol/L替米沙坦干预成熟3T3-L1,Western印迹检测pPPARγ/PPARγ,ELISA检测培养基脂联素含量.结果 TNF-α刺激及替米沙坦干预后各组CDK5表达差异均无统计学意义(均P>0.05).与TNF-α组相比,T5组、T10组pPPARγ/PPARγ降低,脂联素含量增加,差异均有统计学意义(均P<0.05),T0.1组差异均无统计学意义(均P>0.05).与3T3-L1野生型(WT)相比,S186A、S112A组加入TNF-α后pPPARγ/PPARγ升高,脂联素降低,加入替米沙坦后pPPARγ/PPARγ降低,脂联素含量增加,差异均有统计学意义(均P<0.05),S273A组pPPARγ/PPARγ、脂联素差异均无统计学意义(均P>0.05).异丙醇萃取显示沉默CDK5组(shCDK5)与随机对照(shCon)组相比3T3-L1分化差异无统计学意义(P>0.05),Western印迹显示与shCDK5组相比,shCon组加入替米沙坦后pPPARγ/PPARγ降低,脂联素增加,差异均有统计学意义(均P<0.05).结论 替米沙坦能够缓解因TNF-α刺激导致的PPARγ磷酸化水平升高,上调脂联素含量.CDK5介导了替米沙坦对3T3-L1脂肪细胞PPARγ信号通路的影响.替米沙坦的作用位点为PPARγ第273位丝氨酸,PPARγ第273位丝氨酸上游激酶为CDK5.

关键词：细胞周期蛋白依赖激酶5、过氧化物酶体增殖物激活受体γ、3T3-L1细胞、替米沙坦

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在线出版日期：2018-08-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：2104-2109