脂多糖诱导巨噬细胞释放的外泌体在小鼠急性肺损伤中的作用及其机制

摘要：

目的 探讨脂多糖诱导巨噬细胞( RAW264.7细胞)释放的外泌体在小鼠急性肺损伤中的作用及其机制.方法 体外培养RAW264.7细胞,设置对照组和脂多糖刺激组,超速离心法提取两组细胞的外泌体,分别命名为对照EXO组和脂多糖EXO组. (1)体内实验:将18只C57BL/6雄性小鼠按随机数字表法随机均分成正常对照组、正常外泌体组、脂多糖刺激外泌体组各6 只,造模12 h后放血处死,取肺组织行HE染色;行白细胞介素(IL)-1β和肿瘤坏死因子(TNF)-α的免疫组化评价;Western印迹检测各组IL-1β、TNF-α、β-链蛋白、E-钙黏蛋白、紧密连接蛋白1(ZO-1)和封闭蛋白的相对表达量;行组织切片免疫荧光对比各组间封闭蛋白的表达差异. (2)体外实验:将磷酸缓冲盐溶液(PBS)、对照EXO组和脂多糖EXO组外泌体与小鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞( MLE-12细胞)共培养,设置空白对照组、对照EXO刺激组、脂多糖EXO刺激组. 12 h后检测胞中IL-1β、TNF-α和封闭蛋白的相对表达量.结果 对照EXO组和脂多糖EXO组鉴定为外泌体. (1)体内实验:脂多糖刺激外泌体组肺组织出现肺泡腔及间质内广泛炎症细胞浸润,肺泡腔内有渗出液,肺泡隔增厚,肺泡及间质充血、出血,部分肺泡塌陷、不张等肺损伤表现;脂多糖刺激外泌体组肺组织中IL-1β和TNF-α蛋白相对表达量均显著高于正常对照组、正常外泌体组(1.331 ±0.203比0.274 ±0.018、0.892 ±0.074;0.800 ± 0.096比0.596 ±0.025、0.441 ±0.061;均P＜0.05),脂多糖刺激外泌体组肺组织中封闭蛋白相对表达量均显著低于正常对照组、正常外泌体组(0.251 ±0.021比0.862 ±0.029、0.453 ±0.013;均P＜0.05). (2)体外实验:脂多糖EXO刺激组中IL-1β和TNF-α蛋白相对表达量均显著高于空白对照组、对照 EXO 刺激组(0.900 ±0.033 比0.320 ±0.030、0.661 ±0.028;0.739 ±0.045 比0.151 ± 0.024、0.360 ±0.037;均P＜0.05),脂多糖EXO刺激组封闭蛋白相对表达量均显著低于空白对照组、对照EXO刺激组(0.585 ±0.082比0.941 ±0.090、0.732 ±0.083;均P＜0.05).结论 脂多糖诱导的RAW264.7细胞释放的外泌体导致小鼠发生急性肺损伤,且与肺泡Ⅱ型上皮细胞封闭蛋白的下调密切相关.

关键词：急性肺损伤、巨噬细胞、外泌体、脂多糖

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资助基金：国家自然科学基金81370158,81570064;广东省自然科学基金2014A030313269;National Natural Science Foundation of China81370158, 81570064;Natural Science Foundation of Guangdong Province of China2014A030313269

在线出版日期：2018-08-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：1780-1785