靶向干扰DNA-PKcs表达抑制胶质瘤细胞恶性表型及增敏替莫唑胺疗效的分析

摘要：

目的 研究DNA依赖的蛋白激酶催化亚基(DNA-PKcs)的表达对胶质瘤细胞生长、侵袭、以及化疗敏感性等生物学行为的影响,并探讨其潜在机制.方法 选取人胶质瘤细胞系H4、U87细胞,分别转染阴性对照(空白对照组)和DNA-PKcs小干扰RNA(siRNA,实验组),利用实时定量PCR(qPCR)与蛋白质免疫印迹技术检测敲降效率;随后,分别采用MTS法检测细胞生长、Transwell小室模型检测细胞侵袭能力,以及利用MTS法检测替莫唑胺半数致死剂量(IC50),探究低表达DNA-PKcs对胶质瘤细胞系上述生物学行为的影响.结果 与空白对照组相比,DNA-PKcs特异性siRNA能显著降低靶基因mRNA与蛋白的表达水平;MTS检测发现,实验组细胞72 h生长能力仅为对照组的52.48%、54.70%(H4细胞)以及52.98%、50.45%(U87细胞);Transwell小室模型检测显示,空白对照组与实验组细胞侵袭能力分别为1.00±0.03、0.41±0.05、0.39±0.04(H4细胞)以及1.00±0.02、0.28±0.04、0.27±0.04(U87细胞);同时,低表达DNA-PKcs还能显著降低替莫唑胺(TMZ)的IC50值(H4细胞:249±27,97±39,88±35;U87细胞:485±41,86±49,73±38);利用免疫印迹技术深入探究降低DNA-PKcs对上述表型影响的潜在机制,结果发现AKT信号通路活性随DNA-PKcs表达水平的降低而下调;相较于空白对照组,实验组中AKT下游效应蛋白,例如c-Myc、MMP9及Survivin表达水平也存在不同程度的下调.结论 降低DNA-PKcs表达水平能显著抑制胶质瘤细胞生长、侵袭能力,增强替莫唑胺的治疗敏感性,其机制主要与抑制AKT信号通路以及下游效应分子表达水平有关.

关键词：神经胶质瘤、RNA干扰、侵袭、替莫唑胺

所属期刊栏目：97

分类号：R73;R39

资助基金：国家自然科学基金81472661National Natural Science Foundation of China 81472661

在线出版日期：2017-08-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：2463-2467