细颗粒物加剧慢性阻塞性肺疾病小鼠肺泡巨噬细胞吞噬功能缺陷的PI3Kδ-RhoA细胞骨架机制

摘要：

目的 探讨细颗粒物(PM2.5)加剧慢性阻塞性肺疾病(简称慢阻肺)小鼠肺泡巨噬细胞(AM)吞噬功能缺陷的磷脂酰肌醇3-激酶δ(PI3 Kδ)-Ras同源基因家族成员A(RhoA)细胞骨架机制.方法 40只小鼠按随机数字表法分为健康对照组、慢阻肺组、健康PM2.5组、慢阻肺PM2.5组各10只.采用香烟烟雾暴露法建立慢阻肺小鼠模型,健康PM2.5组及慢阻肺PM2.5组小鼠连续雾化吸入PM2.5(588 μg/m3)90 d.不连续密度梯度离心法分离AM;流式细胞术检测AM吞噬异硫氰酸荧光素标记大肠杆菌(FITC-E.coli)能力,用平均荧光强度(MFI)和吞噬阳性细胞百分比(吞噬％)表示;实时荧光定量PCR和Western印迹法检测AM mRNA和蛋白的表达;小G蛋白活性检测试剂盒检测RhoA活性;激光共聚焦显微镜观察AM细胞骨架.结果 慢阻肺组和健康PM2.5组MFI和吞噬％[4 512 ±517、(32.19 ±4.57)％和7 631±585、(50.78±4.58)％]均显著低于健康对照组[9 857±1 042、(68.53±2.88)％],且慢阻肺PM2.5组[3 121 ±393、(21.90±2.58)％]均显著低于慢阻肺组(均P＜0.01).慢阻肺组和健康PM2.5组PI3K8 mRNA、蛋白表达(3.41±0.54、0.84±0.08和1.52±0.35、0.71 ±0.11)均显著高于健康对照组(1.00±0.00、0.57 ±0.07)(均P＜0.05),且慢阻肺PM2.5组(5.53 ±0.42、1.17 ±0.25)均显著高于慢阻肺组(均P＜0.01).慢阻肺组和健康PM2.5组RhoA mRNA、蛋白表达及活性(0.70±0.07、0.41 ±0.10、0.70±0.06和0.84±0.06、0.46±0.11、0.87 ±0.07)均显著低于健康对照组(1.00±0.00、0.56±0.09、1.19±0.09)(均P＜0.05),且慢阻肺PM2.5组(0.42 ±0.05、0.31 ±0.06、0.44±0.04)均低于慢阻肺组(均P＜0.01).AM细胞骨架:健康对照组伪足伸出长而密集,细胞可见明显膜皱褶;慢阻肺组和健康PM2.5组伪足伸出短且稀疏,细胞轻微变形;慢阻肺PM2.5组伪足伸出障碍,细胞形态僵硬,吞噬FITC-E.coli能力明显受损.基础状态及PM2.5干预后,PI3K8 mRNA、蛋白表达与RhoA mRNA、蛋白表达及活性均呈负相关(均P＜0.01),PI3Kδ mRNA、蛋白表达与MFI均呈负相关(均P＜0.05),RhoA mRNA、蛋白表达及活性均与MFI均呈正相关(均P＜0.05).结论 PM2.5过度活化PI3K8,抑制RhoA活性致细胞骨架异常重排加剧慢阻肺小鼠AM吞噬功能缺陷.

关键词：肺疾病、慢性阻塞性、颗粒物、巨噬细胞、肺泡、细胞骨架、小鼠

所属期刊栏目：97

分类号：R37;R28

资助基金：国家自然科学基金81670033National Natural Science Foundation of China 81670033

在线出版日期：2017-07-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：1893-1898